文档介绍：标准蛋白曲线制作 标准蛋白曲线
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量
一、 标准曲线
通常用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后依据标准曲线查出所测物质的含量。所以，制作标准曲线是生物检测分析的一项基础技术。
二、 蛋白质含量测定方法
1、 凯氏定氮法
2、 双缩脲法
3、 Folin-酚试剂法
4、 紫外吸收法
5、 考马斯亮蓝法
三、 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作
、试剂：
1、 考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含%考马斯亮蓝G—250,%乙醇，%H3PO4。
2、 标准蛋白质溶液：
纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，依据其纯度同/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
、器材：
1、722S型分光光度计。
2、移液管。
、标准曲线制作：
试管编号 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml标准蛋白
/L NaCl
考马斯亮蓝试剂
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
1、A595nm
2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标轴上绘制标准曲线。
1 、利用标准曲线查出回归方程。
2 、用公式计算回归方程。
3 、或用origin作图 ，测出回归线性方程。即A595nm=a×X+6 通常相关系数应过以上，最少2个9以上。
4 、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。
、蛋白质含量的测定：
样品即所测蛋白质含量样品，根据操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
通常被测样品的A595nm值在—之间，因此上述样品假如A595nm值太大，能够稀释后再测A595nm值，然后再计算。
、注意事项：
1、 玻璃仪器要洗涤洁净。
2、 取量要正确。
3、 玻璃仪器要干燥，避免温度改变。
4、 对照：用被测物质以外的物质作空白对照。
药品的配制
一、药品的配制步骤
、试验准备：
1、 准备所需的药品和玻璃仪器。
2、 洗涤。
、计算：
1、百分比浓度计算：
1)、G/V比
比如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100ml 水。
2 、V/V比：
比如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X, X=75ml。取75ml无水乙醇，加25ml蒸馏水。
乙醇：***：***=2：1：2配500ml，各取200 ml，100 ml，200 ml混合。
3 G/V比：用的较少，如计算灰分中某种元素
如Fe的含量。
2、摩尔浓度计算：注：药品的分子量通常在标签中注明。
1 、或/L NaCl配100ml。
M=质量/体积称取××40= 摩尔数=G/摩尔质量
2 、配100ml
mM=毫摩尔数/体积 称取××40=