生物制药技术-第四章-抗体制药.ppt

文档介绍：第一节 概 述
1890年Behring和北里柴三郎等人发现了白喉抗毒素，并建立了血清疗法，开创了抗体制 药的先河。至今，以破伤风抗毒素血清为首的抗体制剂仍是紧急预防和治疗以毒血症为主要发 病机制的疾病的有利武器。
1937年Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、甲种(α) 蛋白、乙种(β)球蛋白和丙种(γ)球蛋白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。因而，在 相当长一段时间内丙种球蛋白成为抗体的同义词。从血库的陈旧贮血、胎盘中精制的丙种球蛋白制剂也是用于紧急预防甲型肝炎等传染病的有效药物。
生物制药技术-第四章-抗体制药
因此，抗体是指能与相应抗原特异性综合的具有免疫功能的球蛋白。它是机体免疫系统受 抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。20 。患者血清中也出现 同抗体分子结构类似的球蛋白。因此，将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为 免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。
显然，Ig是化学结构上的概念，而抗体是生物学功能上的概 念。也就是说，所有抗体均是Ig，但并非所有Ig分子都具有抗体活性。由于病原微生物是含有 多种抗原决定簇的抗原物质，， 即针 对多种抗原决定簇的抗体。这些抗体制剂在应用过程中经常发生非特异性交叉反应而出现假阳 性结果，必须经多次吸收试验才能得到所谓的精制单价血清，用于临床病原学诊断，如痢疾杆菌 属诊断血清和沙门氏菌属诊断血清等。虽然称为精制单价血清，但仍然难免出现假阳性结果;。
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1975年Kohler和Milstein等人首次利用B 淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体( monoclonal antibody，McAb)。他们将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释 纯度抗体。这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又是单一的B淋巴细胞克隆产生的，故称为单 克隆抗体(图4-1)。单克隆抗体具有高度特异性、均一性，有稳定来源可大量生产等特点，为抗体 。单克隆抗体作为抗体制剂，在临床实践中，主要用于疾病的诊断和治疗两个方面。如利用单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗原辅助临床诊断，或用同位素标记单克隆抗体进行肿瘤显像做免疫定位诊断。
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单克隆抗体制剂也用于临床治疗，如针对T淋巴细胞共有的分化抗原CD的单克隆抗体，因其对器官移植排斥反应有显著的抑制效果，用作免疫抑制剂己在美国批准上市。以单克隆抗体作为载体的药物可对肿瘤进行定向治疗。
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但是，临床应用的实践证明，免疫导向疗法并没有成功，其障碍有:
①单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody， HAMA)，加速了排斥反应，在人体内半衰期只有5~6 h，难以维持有效药物作用靶组织时间。
②完整的抗体分子，即Ig的相对子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。
基于上述原因，需从两个方面对单克隆抗体加以改造.
①降低单克隆抗体的免疫原性。
②降低单克隆抗体的相对分子质量。可以利用基因工程技术制备出基因工程抗体，即可达到上述两个目的。
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从1984年报道人鼠嵌合抗体以来，已制备出改形抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等诸多类型，基本上己消除了单克隆抗体的鼠源性(免疫原性)，相对分子质量只有完整抗体分子的1/3 ~ 1/80，原来鼠源性单克隆抗体的诸多生物学活性业已消失，如激活补体、促进吞噬功能(免疫调理〉、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等均消失殆尽，只保留问抗原特异性结合的活性，即仅应用其导向作用，制备导向药物用于肿瘤治疗。短短的几年研究使这个领域得以迅速发展，目前已成为抗体应用研究的热点。
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第二节单克隆抗体及真制备
制备单克隆抗体的一般流程如图4-2所示，有下述各步骤操作。
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一、抗原与动物免疫
制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。有 。但在多数情况F抗原物质只能得到部分纯化，甚至 是极不纯的混合物，如部分纯化的干扰素。再通过克隆化选出最适