文档介绍：第第1616章章
药物敏感试验的细胞培养法药物敏感试验的细胞培养法
一、细胞培养在药物敏感试验中的作用一、细胞培养在药物敏感试验中的作用
z 采用细胞培养法可以检测细胞系(株)对药物的
敏感性,还可作体内和体外敏感性的比较,也可
观察到体外细胞不同药物所引起的形态结构和生
理、代谢的变化。
z 帮助解决药物的机制问题,精确地测定和计算出
各种药物的有效作用浓度。
z 有效作用浓度,即IC50(半数抑制浓度) 为使
50%的细胞生长受到抑制的药物浓度。
(一)细胞培养法进行抗癌药物研究的优点:(一)细胞培养法进行抗癌药物研究的优点:
z 、环境与药物对组织细胞的效
能。
z
间。
z 、
内分泌系统发挥间接作用。
z ,直接用人细
胞作为实验对象,起到了从动物试验过度到人体临床试
验的桥梁作用。
z ,无需动物,结果稳定,重复性
强,既节约了药物和动物所消耗的成本,又避免了动物
的个体差异,结果和结论可靠性强。
z ,可获得均一性的遗传背景。
z 7,可结合使用多种技术方法检测药物反应,从多方面
揭示药物、药效特性。
(二)试验中应注意的问题(二)试验中应注意的问题
z ,进入体内在某些
酶的激活下可产生致癌作用,另外还存在着癌细胞耐药
性问题。
z ,细胞培养比较适用于单质药物测试,在用
复方药或中药进行试验时,由于药物成分多,加上每批
药物之间可能存在着质和量上的差异,评价时应考虑这
些因素,持客观而谨慎态度。
z ,应设溶剂对照组,以排
除溶剂作用。
z 药物的敏感性试验方法很多,不同的药物由于作用机制
不同,应根据实际情况选择适当的方法。
二、体外药物对肿瘤细胞的敏感试验二、体外药物对肿瘤细胞的敏感试验
z 1、美蓝法:
z 2、染料排除法
z 3、生长曲线测定法
z 4、集落形成试验法(1)肿瘤干细胞的集落形成
试验(2)造血干/祖细胞的集落形成试验
z 5、噻唑盐(MTT)比色法
z 6、放射性同位素的3H-TdR掺入法
z 7、抗癌药物的效能比测定法(CFU-F测定
法)
11、美蓝法:、美蓝法:
z 其原理是利用活细胞的脱氢酶提供氢离
子,使甲烯兰(美蓝)还原为甲烯白(无
色),细胞死亡之后,脱氢酶失活,无法
使甲稀蓝还原,因此被染成蓝色,检测
用药后的死细胞数能反映药物的抑瘤作
用,此方法假阳性率较高,但方便、简
单、周期短。
22、染料排除法、染料排除法
z 根据活细胞在低浓度染液中不着色的特
点,%%伊红染
料,当药物导致细胞死亡时,细胞膜通
透性增加,致使染料进入胞内而着色,
加药后计算着色细胞数,以示药效,由
于某些濒临死亡的细胞不易着色,故假
阴性较高。
33、生长曲线测定法、生长曲线测定法
z 癌细胞在最适条件下呈指数生长,当细
胞处于对数生长期时用于试验,以细胞
数的对数与培养时间可得一条生长曲
线,比较加药组和对照组细胞生长曲
线,可反映出药物对肿瘤细胞生长的影
响(抑瘤效应)。本试验可获得三方面
的数据。
药物对细胞生长的抑制率:药物对细胞生长的抑制率:
z 将对照组及加药组细胞生长曲线的线性
部分延伸至y轴,可分别得到载距No及
No'。它们分别代表二者接种后具有增殖
力的细胞数,药物对增殖细胞的抑制率
=[(No-No')/No]×100%。
药物对倍增时间药物对倍增时间(TD)(TD)的影响:的影响:
z 以t代表培养时间,No及Nt分别代表接种
时刻及经培养t小时后的细胞数,按下列
倍增时间计算公式计算倍增时间,如果
药物组倍增时间延长表明药物使细胞增
殖能力减弱。计算公式如下:
z log2
z TD=t———————
z logNt- logNo