文档介绍：第四章 DNA复制(DNA Replication)
DNA复制概览
细菌DNA复制
真核DNA复制
掌握原核生物和真核生物DNA的复制特点
熟悉原核生物和真核生物DNA复制的酶系统
第一节 DNA复制概述
第二节 DNA复制的酶学
第三节原核生物DNA复制
第四节真核生物DNA复制
第一节 DNA复制概述(DNA Replication: An Overview)
一、基本概念
二、DNA的半保留复制
三、复制起点、方式和方向
四、DNA复制的半不连续性
一、基本概念
复制子(Replicon,复制单位或复制元)
DNA中含有一定复制起点和复制终点的复制单位。 — 90万不等
A unit of the genome in which DNA contain a region from origin to terminator
复制体(Replisome):复制叉处的许多酶和蛋白组成的复合体,协同动作合成DNA。
The multi protein (30±) structure that assembles at replicating fork to undertake synthesis of DNA
二、DNA的半保留复制
(Semi-Conservation Replication)
CsCl (Cesium chloride) density gradient ultracentrifugation( CsCl密度梯度超离心)
Labeled DNA with 15N 14N
三、复制起点、方向和方式
All prokaryotic chromosomes and many bacteriophage and viral DNA molecules are circles prise single replications. (单复制子)
1、复制起点(origin,ori 或 O,复制原点)复制开始处DNA分子的特定位置
原核生物(Prokaryote):单复制起点,即——整个染色体只有一个复制单位
真核生物(Eukaryote): 多复制起点,即--一个genome中有多个复制单位
2、复制方向(复制过程的顺序性)
复制叉(Replication fork):染色体中参与复制的活性区域,即复制正在发生的位点
复制眼(replication eye):电子显微镜下观察正在复制的DNA,复制的区域形如一只眼睛
真核生物的多复制子多个复制眼
(1)单双向复制取决于起点处有一个还是两个复制叉
(2) 复制的多模式
单起点、单方向(原核)
多起点、单方向(真核)
单起点、双方向(原核)
多起点、双方向(真核)
3、复制方式
(1) 从新起始( de novo initiation )或复制叉式( replication fork )
(2) 置换式( Displacement form)又称 D 环复制
(3)共价延伸方式(covalence elongation)或滚环式复制(rolling circle replication)
DNA复制方式
(1)从新起始( de novo initiation )或复制叉式( replication fork )或θ复制
A replication eye forms a theta structure in circular DNA.
(2) 置换式 Displacement form ,又称 D 环复制
线粒体和叶绿体 DNA的复制方式
(3)共价延伸方式(covalence elongation)或滚环式复制(rolling circle replication)
由于复制时产生的滚环结构形状象σ,又称σ复制
病毒、细菌因子
四、DNA复制的半不连续性
(Semi-Discontinuous Replication)
复制方向的问题:
冈崎片段(Okazaki fragment)
1968年冈崎(Reiji Okazaki)设计了两组实验,其一是脉冲标记实验(pilse-labeling experiment)。(t-)菌株,并分别用dTTP(3H-T)进行2’’,7’’,15’’,30’’,60’’,120’’的脉冲标记,分离提取T4噬菌体DNA,变性后,进行Cscl密度梯度离心,以检测具放射性的沉降片断,判断片断大小。结果表明经不同标记时间的,被3H-T标记的新合成的DNA片段几乎都为10-20s,即均为1000-20