文档介绍：第十一章 野生动物保护管理中的 分子生物学技术
野生动物保护主要目的是应用科学解决由于人类的干扰或其他因素引起的物种、群落和生态系统问题,提供生物多样性保护的原理和工具。
同工酶研究及应用
60年代中期后,应用于基因表达、系统分类
等位酶:
等位基因编码的同工酶,基因表达的直接产物,反映基因组成差别,可做为系统分类依据,其位点按孟德尔方式遗传,绝大多数位点共显性。分析等位酶位点,比较数值---计算等位基因、基因型频率---估测种内、间遗传变异水平;
LDH:
A、B二种亚基聚合成不同形式四聚体,实验步骤:动物cell---缓冲液----离心---取上清---聚丙烯胺电泳。
应用:赤狐、兔、鼬、犬科、熊科系统发育研究
RFLP遗传标记的研究和应用 (Restriction fragment length polymorphism): 限制性片段长度多肽性
已应用于人类遗传病的基因定位、基因诊断、法医生物物证验证、精细遗传图谱建立、遗传育种、物种进化;
RFLP的获得:基因组DNA---已知的限制性内切酶消化---电泳印迹----DNA探针Southern杂交----DNA探针的多态性图谱;
表现;基因组中DNA中与探针同源的DNA序列,经限制性内切酶消化后长度的差异;
RFLP可看作遵循遗传规律的共“显性”性状,杂种F1 代,具有双亲的RFLP,在F1代自由分离,RFLP之间或与表型性状之间存在连锁,RFLP是DNA水平上的研究。
PCR、RAPD、AFLP技术及应用
PCR(Polymerase chain reaction):特异性DNA体外圹增技术
首先合成2个小片段的聚核苷酸引物(Zobp)----二种引物分别与待扩增的DNA片段(模板)正、负链两端互补----引物片段与待扩增DNA片段混合加热变性=>退火=>引物片段与相应DNA模板互补杂交,加入4 种dNTP和DNA聚合酶=>DNA扩增=>再加热变性、退火----第一轮得到的DNA扩增链又作为模板与引物片段杂交----进入第二轮----最后扩增DNA数量Y=(1+X)n ,x:反应平均速率,n:反应轮数;
应用:微量DNA鉴定、检测,基因分离、克隆,DNA序列分析,突变体、重组体的构造基因表达与调控,遗传病、传染病的诊断,法医鉴定。
RAPD(Random amplified Polymorphism DNA):建立在PCR基础上
用随机脱氧核苷酸序列作引物(10bp)---对所研究的基因组DNA进行PCR扩增---扩增产物经琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳分离----染色或放射自显影检测扩增产物DNA多态性,这些扩增DNA片段的多态性便反映了基因组相应区域的DNA多态性。
RAPD不需要专门设计已知序列的引物,但对于特定引物,它在基因组DNA序列上有其特定结合位点,只要这些位点在基因组某些区域内的分布符合PCR扩增条件,可扩增出相应的DNA片段,如果基因组在这些区域发生DNA片段的插入、缺失或碱基突变可导致特定位点的分布发生改变,出现扩增产物增、减或在分子量上改变,单一引物可使检测区域扩大到整个基因组,所以RAPD可对整个基因组DNA多态检测。
应用:遗传多样性分析,物种起源、进化、分类、育种。
AFLP(Amplified Fragment Length Po