文档介绍：三磷酸腺苷二钠片微生物程度检验法验证研究_三磷酸腺苷二钠片
摘要：建立三磷酸腺苷二钠片的微生物程度检验方法。采取常规法对样品进行方法验证。结果五种要求试验菌的回收率均不低于70%，可用于三磷酸腺苷二钠片的微生物程度检验。
关键词：三磷酸腺苷二钠片；微生物程度检验；方法验证
三磷酸腺苷二钠片是细胞代谢改进药。依据其制剂用药路径，应进行细菌数、霉菌和酵母菌数的测定、及控制菌—大肠埃希菌检验。经试验研究，确定采取常规法进行细菌数、霉菌和酵母菌数、大肠埃希菌检验。经对所确定的方法进行验证，符合2021年版中国药典二部附录ⅪJ相关微生物程度检验法相关要求，方法可行。
1 试验仪器、试药
试验菌种
枯草芽孢杆菌CMCCB63501、金黄色葡萄球菌CMCCB26003、大肠埃希菌CMCCB44102、白色念珠菌CMCCF98001、黑曲霉CMCCF98003。
样品：三磷酸腺苷二钠片：批号： 20211101，20211102，20211103。
培养基及稀释剂
营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基，胆盐乳糖培养基BL，改良马丁培养基，MUG培养基，曙红亚甲蓝琼脂培养基， 无菌***化钠—蛋白胨缓冲液，%无菌***化钠溶液等。
仪器
培养箱、高压蒸汽灭菌器等。
2 细菌数、霉菌和酵母菌数测定方法的建立及验证
菌液制备
取经35℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤培养物用%无菌***化钠溶液制备成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，备用；取经25℃培养24～48h的白色念珠菌液体培养物用%无菌***化钠溶液制备成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，备用；取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加10 ml %无菌***化钠溶液洗下霉菌孢子，吸收菌液用%无菌***化钠溶液制备成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，备用。
供试液的制备方法
常规法：取样品10g，用无菌***化钠—蛋白胨缓冲液制成1：10的供试液；取1：10的供试液1ml注皿。
回收率试验
试验组：同，另分别取各试验菌50～100CFU，分别注入同一平皿中，立刻倾注琼脂培养基，待凝固后，置要求温度，细菌培养24～48h，白色念珠菌和黑曲霉培养48～72h。
菌液组：取试验菌50～100CFU注入平皿中，立刻倾注琼脂培养基，待凝固后，置要求温度，细菌培养24～48h，白色念珠菌和黑曲霉培养48～72h，测定所加入的试验菌数，平行制备2个平皿。
供试品对照组：同，立刻倾注琼脂培养基，待凝固后，置要求温度，细菌培养24～48h，霉菌和酵母菌培养48～72h，测定供试品本底菌数。
方法确实定
选取金黄色葡萄球菌、白色念珠菌作为敏感菌株进行预试验，结果： 金黄色葡萄球菌回收率为97%，白色念珠菌回收率为93%，表明三磷酸腺苷二钠片对细菌、真菌没有抑制作用，采取常规法进行细菌数、霉菌和酵母菌数测定可行。稀释剂无抑菌作用，对试验无干扰。
细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证
三批号样品的验证试验结果表明，以常规法进行三磷酸腺苷二钠片细菌数、霉菌及酵母菌数测定，五种要求试验菌的回收率均大于70%，符合中