文档介绍：乳铁蛋白的分离纯化方法研究乳清水中乳铁蛋白分离
摘 要：牛初乳中含有极丰富的生物活性物质，是提取和利用乳铁蛋白的最适之一。乳铁蛋白的分离纯化方法较多，本文概述了盐析和有机溶剂法、超滤法、离子交换色谱法、亲和色谱法、吸附色谱法、固定化单克隆抗体法和混合模式扩张床吸附法等，就其工业化生产的前景进行了分析。
关键词：乳铁蛋白 分离纯化 方法
中图分类号：S5 文件标识码：A 文章编号：1672-3791202104b-0002-02
20世纪40年代，从乳清蛋白中分离得到了一个含Fe3+红色蛋白，作为血清铁结合传输蛋白TF的类似物，称之为乳铁蛋白1actoferrin，Lf，又称乳转铁蛋白，关键存在于大多数哺乳动物乳汁中的铁结合糖蛋白。Lf分子量约为80000u，多肽链上有两条糖链，包含半乳糖甘露糖N一乙酞半乳糖***、岩藻糖和涎酸等。因为Lf含有部分非凡的生理功效作用，能够促进铁吸收、广谱抗菌、免疫增强、抗病毒、抗癌等，因此应用高新技术对Lf的进行分离、纯化和综合利用的研究，成为食品界和乳品行业关心的热点问题。
大家采取多种多样的方法来分离提纯Lf，比如盐析和有机溶剂法、超滤法、离子交换色谱法、亲和色谱法、吸附色谱法、固定化单克隆抗体法和混合模式扩张床吸附法等等。
1 盐析和有机溶剂法
依据蛋白等电点沉淀原理，Lf等电点为～，因为多种蛋白等电点范围交叉分布，因此极难将一个蛋白完全沉淀析出。曲练达等1用两次NH42SO4和一次乙醇沉淀分离纯化Lf，纯度达45%左右。邬向东等2以饱和NH42SO4盐析分离，经Sephadex G-100葡聚糖凝胶过柱纯化，并利用聚乙二醇浓缩取得了Lf。盐析法比色谱法简单，易于操作，且成本较低，但此方法得率低，产品纯度不高。但适合用于保健品和食品添加剂等纯度要求不高的行业。
2 超滤法
依据膜孔径不一样来实现不一样分子质量和形状的大分子的分离。日本学者岛崎敬选取孔径分别为l0PS、30PS、50PS、l00PS、300PS、1000PS和3000PS的七种系列超滤膜膜，以干酪乳清为原料，先截留小分子量，再截留大分子量，其分子量分别为104、3×104、5×104、105、3×105、106、3×106，生产Lf基料的回收率为69%。卢蓉蓉等3用超滤法从初乳中初步分离得质量分数为26%的Lf粗品，虽适合大规模生产，但还无法提取高纯度的Lf。为强化传质和分离过程，Brisson等4在分离过程中添加了一个外加电场强化膜通量，降低膜污染，可用于组分复杂的料液。Ndiaye等5用电场强化的超滤膜过滤分离Lf，但其中含有β-乳球蛋白等杂蛋白，产品纯度不高，需深入纯化。超滤法不加热或不发生相变，适合热敏性功效性组分的分离。操作简便，费用相对较低，易于形成工业化规模，是生产食品用乳铁蛋白最具实现工业化潜力的方法之一。但纯度不如色谱法高，且膜孔堵塞需常常清洗，且不易清洗。
3 离子交换色谱法
传统离子交换色谱法
依据离子交换剂对不一样离子或化合物的结协力不一样实现物质分离，结协力的大小由离子交换剂决定。Grove使用DEAE纤维素阴离子交换树脂和磷脂纤维素交换色谱法分离出较纯的Lf。由Foley等6用羧***阳离子交换色谱法对此法加以改善，用pH值为，