文档介绍：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:垒逮签字日期: 12年上月旦日学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使用学位论文的规定,同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。论文作者签名: 指导教师签名: 签字日期: 诱导人结肠癌耐药细胞模型lovo/雷替曲塞及耐药相关蛋白变化的基础研究硕士研究生: 指导教师: 指导小组: 专业名称: 摘要刘开泰张阳教授张阳教授韩秀敏博士肿瘤学大肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤,其发病率和死1亡率逐年增加。化学治疗在大肠癌治疗中占有重要位置,其中5-FU一直是治疗此病的主要化疗药物。雷替曲塞(ZDl694)是一种新型时酸拮抗类药物,由英国泽内卡(a)公司研制,主要用于晚期结直肠癌的治疗。从国内外大量临床应用和文献来看,该药治疗晚期结直肠癌疗效较好,不良反应较轻, 具有很大的应用前景。进行结肠癌细胞对雷替曲塞耐药机制的基础研究对新药的开发及更好地指导其临床用药都具有很大的现实意义。目的:诱导人结肠癌细胞株lovo对雷替曲塞产生获得性耐药获得耐药细胞模型lovo/雷替曲塞并研究耐药相关蛋白PgP,. Ⅱ的表达情况和耐药前后表达的变化。方法:采用药物大剂量间断冲击法建立人结肠癌lovo细胞耐药模型。药物大剂量冲击四次后(第一次雷替曲塞200ug/ml作用6小时,细胞死亡大于95%,经过3 5天细胞恢复生长;第二次雷替蓝塞400ug/ml作用6 小时,经过28天细胞恢复生长;第三次雷替曲塞400ug/ml作用6小时, 经过25天细胞恢复生长;第四次雷替曲塞400ug/ml作用6小时,经过 20天细胞恢复生长1,获得lovo/雷替曲塞耐药细胞模型。倒置显微镜下观察lovo/雷替曲塞和亲本lovo细胞的细胞形态,测定两者的倍增时间并绘制生长曲线。采用MTT法检测两者对雷替曲塞的敏感性,计算lovo/ 雷替曲塞细胞的耐药倍数。采用免疫细胞化学法检测耐药相关蛋白在人结肠癌lovo细胞株和耐雷替曲塞模型lovo/ Western印记分析法检测上述蛋白在耐药前后表达的变化来推测其在耐药过程中的作用。检测的耐药相关蛋白包括:P糖蛋白(PgP),多药耐药相关蛋白(MRP),谷胱苷肽S转移酶一Ⅱ(OST-Ⅱ)和肺癌耐药相关蛋白(LRP)。结果: ,建立了入结肠癌lovo细胞耐雷替曲塞模型lovo/雷替曲塞,MTT法检测耐药倍数约10倍。 ,细胞形态大小基本一致,都呈长梭形,贴壁生长。倍增时间两者并没有明显区别,生长曲线亦显示两者增值速度基本相同,lovo/雷替曲塞细胞增值略显缓慢。 ,在完全相同的条件下,亲本lovo细胞和耐药细胞lovo/雷替曲塞均表达PgP,MRP,LRP和GST-Ⅱ。 。GST-Ⅱ表达亦有增强,LRP表达基本没有变化。结论: 。 。 。膜蛋白PgP和MRP介导的药物外排机制在其对雷替曲塞产生获得性耐药过程中起重要作用。 -n亦参与耐药过程;LRP并没有参与这个耐药过程。关键词:多药耐药P糖蛋白多药耐药相关蛋白谷胱苷肽S转移酶一Ⅱ肺癌耐药相关蛋自 Induces the human colon careinoma cell line lovo be resistant toraltitrexed and the investigation ofsome resistant related proteins Postgraduate:Liu Kaitai Supervisor:Professor Zhang Yang Conduct team:Professor Zhang Yang MSD Han Xiumin Maj or:Oncology Abstract Background an