文档介绍：实验九培养基的制备
一、目的要求
1.      明确培养基的配制原理
2.      通过对几种常用的培养基的配制,掌握配制培养基的一般方法和步骤。
二、基本原理
培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配置而成的一种混和营养基质,用以培养或分离各种微生物。因此,营养基质应当有微生物所能利用的营养成分(包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素)和水。根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。
微生物的生长繁殖除需一定的营养物质以外,还要求适当的pH范围。不同微生物对pH要求不一样,霉菌和酵母菌的培养基的pH是偏酸性的,而细菌和放线菌的培养基是中性或偏碱性的。所以配制培养基时,都要根据不同微生物对象用稀酸或稀碱将培养基的pH调到合适的范围。但配制pH低的琼脂培养基时,如预先调好pH并在高压蒸气下灭菌,则琼脂因水解不能凝固,因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性pH条件下灭菌后,在调整pH。
此外,由于配制培养基的各类营养物质和容器等含有各种微生物,此外,已配制好的培养基必须立即灭菌,以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基的酸碱度而带来的不利影响。
以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例,学习培养基的配制方法。
牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g
水 1000ml pH -
四、操作步骤
1、计算称量根据配方,计算出实验中各种药品所需要的量,然后分别称(量)取。
2、溶解一船情况下,几种药品可一起倒入烧杯内、先加入少于所需要的总体积水进行加热溶解(但在配制化学成分较多的培养基时,有些药品,如磷酸盐和钙盐、镁盐等混在一起容易产生结块、沉淀,故宜按配方依次溶解。个别成分如能分别溶解,经分开灭菌后混合,则效果更为理想)。加热溶解时,要不断搅拌。如有琼脂在内,更应注意。待完全溶解后,补足水分到需要的总体积。
3、调节pH 用滴管逐滴加入1N NaOH或lN HCl边搅动;边用精密的pH试纸测其pH值,直到符合要求时为止。pH值也可用pH计来测定。
4、过滤要趁热用四层纱布过滤。
5、分装按照实验要求进行分装。装入试管中的量不宜超过试管高度的1/5,装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为限。在分装过程中,应注意勿使培养基沾污管口或瓶口、以免弄湿棉