文档介绍：雅致放射毛霉液体深层通气发酵培养基本操作
培养基组成:
200ml:豆粕粉 6g, 饴糖1g,,,。放入高压灭菌锅,121℃,20min灭菌。灭菌操作完毕,将上述物品并洗耳球转入超净台,接种前20min进行紫外空气灭菌。
培养基组成:
1000ml:豆粕粉30g,蔗糖8g,酵母膏1g,,,CaCl21g。放入高压灭菌锅中,121℃、20min灭菌。操作完毕,取出置于超净台内,接种前20分钟进行紫外空气灭菌。
接种前4小时从冰箱取出1支菌种,在25℃条件下活化。在超净台内,以无菌生理盐水洗涤菌种斜面。孢子悬浮液以每瓶10ml的接种量,接入种子培养基。从超净台取出接好的种子三角瓶,转入摇床,在28℃、250rpm的条件下培养14~16小时,至种子瓶内呈粘稠浆糊状为止。
将已经灭菌的产酶培养基转入超净台,紫外空气灭菌20分钟。将培养好的种子用灭过菌的小烧杯进行转接,每支产酶培养基三角瓶接入20ml左右的种子。在28℃、250rpm的条件下培养36~48小时,至发酵液颜色变深、澄清为止。
蛋白酶活力测定
(1)定义
1 g固体酶粉,在一定温度和pH值条件下,1 min水解酪素产生1 ug酪氨酸为一个酶活单位,以u/g表示。
(2)原理
蛋白酶在一定温度与pH条件下,水解酪素底物,然后加入三氯乙酸终止酶反应,并使未水解的酪素沉淀除去,滤液对紫外光有吸收,可用紫外分光光度法测定。根据吸光度计算其酶活力。
(3)试剂和溶液
① )= mol/L: g,用水溶解并定容至500 mL
②磷酸缓冲溶液(pH=)适用于中性蛋白酶:称取磷酸氢二纳(Na2HPO4·12H2O) g和磷酸二氢纳(NaH2PO4·2H2O) g,加水溶解并定容至500 mL。
③ 100 ug/mL L—酪氨酸标准溶液:
℃干燥至恒重的L- g, g,用1 mol/L盐酸60 mL溶解后定容至100 mL,即为1 mg/mL酪氨酸标准溶液。
mg/ mL, mol/L盐酸定容至100 mL,即得到100 ug/mL L—酪氨酸标准溶液。
④ 10 g/L酪素溶液: g, g, mol/L氢氧化钠湿润后,加入适量的缓冲溶液约80 mL,在沸水域中边加热边搅拌,直至完全溶解,冷却后,转入100 mL容量瓶中,用缓冲溶液稀释至刻度。
⑤待测酶液
,用水使充分溶解,然后将上清夜小心倾入50 mL容量瓶中,并定容至刻度,供测试用。(此时相当于稀释25倍)。
(4)分析步骤