文档介绍：基因工程的酶学基础
限制性核酸内切酶
DNA连接酶
DNA聚合酶
限制性核酸内切酶
(restriction endonuclease)
这类酶又简称为限制性内切酶或限制酶。
是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核苷酸内切酶。
寄主控制的限制(restriction)
与修饰(modification) 现象:
人们发现侵染大肠杆菌的噬菌体都存在着一些功能性障碍。即所谓的寄主控制的限制与修饰现象简称(R/M体系)。
细菌的R/M体系类似于免疫系统,能辨别自身的DNA与外来的DNA,并能使后者降解掉。
R/M体系:
寄主是由两种酶活性配合完成的
一种是修饰的甲基转移酶
另一种是核酸内切限制酶
当λ(k),由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列,被降解掉。,但可在EcoB甲基化酶的作用下,催化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)将甲基转移给限制酶识别序列的特定碱基,使之甲基化。 EcoB核酸酶不能识别已甲基化的序列。
R/M体系的作用:
保护自身的DNA不受限制;
破坏外源DNA使之迅速降解
限制性内切酶本是微生物细胞中用于专门水解外源DNA的一类酶,其功能是避免外源DNA的干扰或噬菌体的感染,是细胞中的一种防御机制。由于R/M现象的发现使得核酸内切酶成为基因工程重要的工具酶。
根据酶的功能、大小和反应条件,及切割DNA的特点,可以将限制性内切酶分为三类: Ⅰ型酶、Ⅱ型酶、Ⅲ型酶
Ⅰ型酶:
1968年,。
分子量较大,反应需Mg++、S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(SAM)、ATP等。这类酶有特异的识别位点但没有特异的切割位点,而且切割是随机的,所以在基因工程中应用不大。