文档介绍：第二章病毒
第五节病毒病的实验室诊断方法
畜禽病毒性传染病是危害最严重的一类疫病,给畜牧业带来的经济损失最大。除少数如绵羊痘等可根据临床症状、流行病学、病变作出诊断外,大多数病毒性传染病的确诊,必须在临床诊断的基础上进行实验室诊断,以确定病毒的存在或检出特异性抗体。病毒病的实验室诊断和细菌病的实验室诊断一样,都需要在正确采集病料的基础上进行,常用的诊断方法有:包涵体检查、病毒的分离培养、病毒的血清学试验、动物接种试验、分子生物学的方法等。
一、病料的采集、保存和运送
病毒病病料采集的原则、方法以及保存运送的方法与细菌病病料的采集、保存和运送方法基本是一致的,不同的是病毒材料的保存除可冷冻外,还可放在50%甘油磷酸盐缓冲液中保存,液体病料采集后可直接加入一定量的青、链霉素或其他抗生素以防细菌和霉菌的污染。
二、包涵体检查
有些病毒能在易感细胞中形成包涵体。将被检材料直接制成涂片、组织切片或冰冻切片,经特殊染色后,用普通光学显微镜检查。这种方法对能形成包涵体的病毒性传染病,具有重要的诊断意义。但包涵体的形成有个过程,出现率也不是100%,所以,在包涵体检查时应注意。(能出现包涵体的重要畜禽病毒见表2-3)
表2-3 能产生包涵体的畜禽常见病毒
病毒名称
感染范围
包涵体类型及部位
痘病毒类
狂犬病病毒
伪狂犬病病毒
副流感病毒III型
马鼻肺炎病毒
鸡新城疫病毒
传染性喉气管炎病毒
人、马、牛、羊、猪、鸡等
狼、马、牛、猪、人、猫、羊、禽等
犬、猫、猪、牛、羊等
牛、马、人
马属动物
鸡
鸡
嗜酸性,胞浆内,见于皮肤的棘层细胞中
嗜酸性,胞浆内,见于神经原内及视网膜的神经节层的细胞中
嗜酸性,核内,见于脑、脊椎旁神经节的神经原中
嗜酸性,胞浆及胞核内均有,见于支气管炎、肺泡上皮细胞及肺的间隔细胞中
嗜酸性,核内,见于支气管及肺泡上皮细胞、肺间隔细胞、肝细胞、淋巴结的网状细胞等
嗜酸性,胞浆内,见于支气管上皮细胞中
嗜酸性,核内,见于上呼吸道的上皮细胞中
三、病毒的分离培养
将采集的病料接种动物、禽胚或组织细胞,可进行病毒的分离培养。供接种或培养的病料应作除菌处理。除菌方法有滤器除菌、高速离心除菌和用抗生素处理三种。如用口蹄疫的水疱皮病料进行病毒分离培养时,将送检的水疱皮置平皿内,,并用灭菌滤纸吸干、称重,剪碎、研磨制成1∶5悬液,为防止细菌污染,每毫升加青霉素1000IU,链霉素1000
μg,置2~4℃冰箱内4~6h,然后用8000~10000r/min速度离心沉淀30min,吸取上清液备用。
被接种的动物、禽胚或细胞出现死亡或病变时(但有的病毒须盲目传代后才能检出),可应用血清学试验及相关的技术进一步鉴定病毒。
四、动物接种试验
病毒病的诊断也可应用动物接种试验来进行。取病料或分离到的病毒处理后接种实验动物,通过观察记录动物的发病时间、临床症状及病变甚至死亡的情况,也可借助一些实验室的方法来判断病毒的存在。此方法尤其在病毒毒力测定上应用广泛。
五、病毒的血清学试验
血清学试验在病毒性传染病的诊断中占有重要地位。常用的方法有:中和试验、补体结合试验、红细胞凝集和凝集抑制试验、免疫扩散试验、免疫标记技术等。血清学试验的详细内容及操作见第十一