文档介绍：第八章菌种的保藏
要点:
菌种的衰退:菌种衰退的现象可表现在形态上或生理上。其主要原因是基因突变,连续传代
和采用不适宜的培养和保藏条件也可加速菌种的衰退。为防止菌种衰退可采取一些措
施,如控制传代次数、创造良好的培养条件、利用不同类型的细胞移种传代、采用有
效的菌种保藏方法、讲究菌种选育技术及定期进行分离纯化等。
菌种的复壮:从已衰退的菌种中筛选出少数尚未退化的个体,以达到恢复原菌株固有性状的
方法是一种“狭义的复壮”,目前较提倡的是被称为“广义复壮”的一种积极措施,
即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前,就经常有意识地采取纯种分离和生产性
状测定工作,以期从中选择到自发的正突变个体。菌种复壮常用方法有:纯种分离法、
宿主体内复壮法、淘汰法和遗传育种法。
菌种的保藏:菌种保藏的目的是尽可能保持菌种原有性状和活力的稳定,使其不死、不变、
不被污染,以提供给科研、生产和实验的需要。为防止突变,保持纯种,最主要的保
藏措施是干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养、添加保护剂等。保藏菌种的方法有:
斜面低温保藏法、石蜡油封藏法、砂土管保藏法、麸皮保藏法、甘油悬液保藏法、冷
冻真空干燥保藏法、液氮超低温保藏法和宿主保藏法等。
第一节菌种的衰退和复壮
在微生物的基础研究和应用研究中,选育一株理想的菌株是一件艰苦的工作,而欲使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性,便于长期使用,还需要做很多日常的工作。实际上,由于各种各样的原因,要使菌种永远不变是不可能的,菌种衰退是一种潜在的威胁。只有掌握了菌种衰退的某些规律,才能采取相应的措施,尽量减少菌种的衰退或使已衰退的菌种得以复壮。
一、菌种的衰退
(一)菌种衰退的现象
菌种衰退(degeneration)是指由于自发突变的结果,而使某物种原有的一系列生物学性状发生量变或质变的现象。菌种衰退的具体表现有以下几个方面:
1. 菌落和细胞形态改变。每一种微生物在一定的培养条件下都有一定的形态特征,如果典型的形态特征逐渐减少,就表现为衰退。例如,泾阳链霉菌
“5406”的菌落原来为凸形变成了扇形、帽形或小山形;孢子丝由原来螺旋形变成波曲形或直形,孢子从椭圆形变成圆柱形等。
2. 生长速度缓慢,产孢子越来越少。例如,“5406”的菌苔变薄,生长缓慢(半个月以上才长出菌落),不产生丰富的桔红色的孢子层,有时甚至只长些黄绿色的基内菌丝。
3. 代谢产物生产能力的下降,即出现负突变。例如,黑曲霉糖化力、放线菌抗生素发酵单位的下降以及各种发酵代谢产物量的减少等,在生产上是十分不利的。
4. 致病菌对宿主侵染能力下降。如白僵菌对宿主致病能力的降低等。
5. 对外界不良条件(包括低温、高温或噬菌体侵染等)抵抗能力的下降等。如抗噬菌体菌株变为敏感菌株等。
值得指出的是,有时培养条件的改变或杂菌污染等原因会造成菌种衰退的假象,因此在实践工作中一定要正确判断菌种是否退化,这样才能找出正确的解决办法。
(二)菌种衰退的原因
菌种衰退不是突然发生的,而是从量变到质变的逐步演变过程。开始时,在群体细胞中仅有个别细胞发生自发突变(一般均为负变),不会使群体菌株性能发生改变。经过连续传代,群体中的负变个体达到一定数量,发展成为优势群体,从而使整个群体表现为严重的衰退。经分析发现,导致这一现象的原因有以下几方