文档介绍：多管发酵法测定水中大肠菌群
考查内容：
一、预****报告（包括提问）
二、操作（无菌操作，随机抽看）
三、实验报告
实验十一(综合实验）
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多管发酵法测定水中大肠菌群
一、实验目的
二、实验原理
三、实验材料
四、实验步骤
五、实验报告
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一、实验目的
1、学****测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
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发酵法： 又称多管发酵法或三步发酵法
1) 初发酵（推测试验）：
将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37 ºC培养24 h，观察产酸产气情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色，以初步判断是否有大肠菌群存在。
二、实验原理
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2）平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。
将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基，37 ºC培养24 h，根据菌落特征（带核心的、有金属光泽的深紫色菌落），挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。
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3） 复发酵试验(完成实验）
将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中，经37 ºC培养24 h，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。
产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应；
根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。
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三、实验材料
1、培养基：
乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。
2、仪器或其他用具：
载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。
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四、操作步骤
1．水样的采取 实验室提供水样
2．河水的检查
（1）初（步）发酵实验
水样的稀释： 10-1与10-2
接种：分别吸取1ml 10-2 、 10-1和原水样接入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管 ；另取10ml原水样接入装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管 ，混匀后，37 ℃培养24 h，24 h未产气的继续培养48 h。
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（2）平板分离
将经24 h和48 h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37 ℃培养18～24 h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。
深紫黑色，有金属光泽；
紫黑色，不带或略带金属光泽；
淡紫红色，中心颜色较深。
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（3）复发酵试验
将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌株重复初步发酵试验。并根据初发酵管试验的阳性管查表，即得大肠菌群数。
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