文档介绍：四食品微生物检验染色法
微生物中细菌、致病菌是很小的生物体,必须通过染色的方法,在显微镜下才能看得清楚,并且还可以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性,以及是否长有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等。
1、美蓝染色法
(一)吕氏碱性美蓝染色液
美蓝
95%乙醇 30ml
%氢氧化钾溶液 100ml
将美蓝溶解于乙醇中,然后于氢氧化钾溶液混合
(二)染色法
将涂片在火焰上固定,待冷却后滴加染液,染 1min~3min,水洗,待干,镜检。
(三)结果
菌体呈蓝色
2、革兰氏染色法
(一)染色液
a、洁净紫染色液
结晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸铵水溶液 80ml
将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。
b、革兰氏碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,在加蒸馏水至300ml。
c、沙黄复染法
沙黄
95%乙醇 10ml
蒸馏水 90ml
将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。
(二)染色法
a、将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。
b、滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。
c、滴加95%乙醇脱色,约30s;或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10s。
d、水洗,滴加复染液,复染1min,水洗,待干,镜检。
(三)结果
革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。
注:亦可用1:10稀释石炭酸复红染色液作复染液, 复染时间仅需10s。
3、耐酸性染色法(萎—倪二氏法)
(一)染色液
a、石炭酸品红染色液
碱性品红
95%乙醇 10ml
5%苯酚水溶液 90ml
将品红溶解于乙醇中,然后与苯酚溶液混合。
b、3%盐酸-乙醇
浓烟酸 3ml
95%乙醇 97ml
c、复染液
吕氏碱性美蓝染色液
(二)染色法
a、将涂片在火焰上固定,滴加石炭酸品红染色液,徐徐加热至有蒸汽出现,但切不可使沸腾。染液因蒸发减少时,应随时添加。染5min,倾去染液,水洗。
b、滴加盐酸-乙醇脱色,直至无红色脱落为止,(所需时间视涂片厚薄而定,一般为1min~3min),水洗。
c、加吕氏碱性美蓝染色液,复染30s~1min,水洗,待干,镜检。
(三)结果
耐酸性细菌呈红色,其他细菌、细胞等物质呈蓝色。
4、柯氏染色法
(一)染色液
a、%沙黄液
b、%孔雀绿液
(二)染色法
a、将涂片在火焰上固定,%沙黄液,并加热至出现气泡,约2min~3min,水洗。
b、%孔雀绿液,复染40s~50s,水洗,待干,镜检
(三)结果
布氏杆菌呈红色,其他细菌及细胞呈绿色
5、奥尔特氏荚膜染色法
(一)染色液
沙黄 3g
蒸馏水 100ml
用乳钵研磨溶解
(二)染色法
将涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加热至产生蒸汽后,继续染3min,水洗,待干,镜检。
(三)结果
炭疽芽孢杆菌菌体呈赤褐色,荚膜呈黄色。
6、瑞氏染色法
(一)染色液
瑞氏色素
甲醇 60ml
用乳钵研磨溶解
(二)染色法
a、待涂片自然干燥后,滴加染色液,固定1min。
b、加入等量蒸馏水(),染色3min~5min。
c、用蒸馏水冲洗,待干,镜检。