文档介绍：实验五微生物培养基
的配制和灭菌
•目的要求
•实验材料
•实验程序
目的要求
•了解培养基(普通营养琼脂、乳糖胆盐发
酵管等)的配制原理和方法,掌握其配制
过程。
•了解几种灭菌方法,掌握干热灭菌法和
加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
•熟悉分离、培养微生物前的有关准备工
作及操作方法。
实验材料
•药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蛋白胨、
乳糖、胆盐、溴钾酚紫等。
•高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱。
•其它:天平、牛角匙、电炉、1N NaOH、pH试
纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带
玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空
试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳
索、棉花、标签等。
实验程序
•培养基的配制
•分离培养微生物常用器皿的准备
•培养基和玻璃器材的灭菌方法
培养基的配制
•培养基的种类
•培养基的配制方法和步骤
•三种培养基的配方及配制
•无菌水的制备
培养基的种类
•据组成成分可分为:
:由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
:有一部分纯化学物质和另一部分天然物
质配制而成。
:利用天然来源的有机物配制而成。
•从培养基的物理状态可分为
:不加凝固剂的液体状态培养基。
:在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固
体状态的培养基或农副产品培养基。
:—%凝固剂而
成的半固体状培养基。
培养基的种类
常用凝固剂为琼脂(其次为明胶),又叫洋菜、冻粉。
培养基的配制方法和步骤
•称量:按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。
•溶化:在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加热溶
解。
•调pH值:用1N NaOH或1N HCl调pH,用pH试纸对
照。
•加琼脂溶化:加热过程中要不断搅拌,可适当补水。
半固体: 1/3
液体分装试管<1/4
•分装:注意不要污染棉塞三角烧瓶<1/2
固体分装试管<1/5
三角烧瓶<1/2
培养基的配制方法和步骤
•分装
•加塞
培养基的配制方法和步骤
•包扎、标记:包扎成捆,标签,注明何种培养基。
•灭菌:牛肉膏蛋白胨培养基
伊红美兰培养基 1210C,15min
生理盐水
乳糖胆盐发酵管 1150C,15min
•搁置斜面: <1/2
•无菌检查:培养基灭菌后必须在370C下恒温培养
24~48h,确定无菌生长,方可使用。