文档介绍：食品卫生细菌的检测技术
第七章
食品卫生细菌的检测技术
第一节菌落总数的测定
第二节大肠菌群的测定
食品卫生细菌的检测技术
第一节菌落总数的测定
一、菌落总数的标准平板培养计数法
(一)原理
平板菌落计数法是通过将样品制成一系列不同的稀释液,使样品中的微生物个体分散成单个细胞状态。再取一定量的稀释度接种,使其均匀分布于培养皿中的培养基上。培养后统计菌落数目,一般认为每个菌落是由一个细菌增殖后形成的,这样就可计算出样品中的含菌数。
(二)仪器用具
冰箱(0~4℃)、恒温培养箱(36℃±1℃)、恒温水浴锅(46℃±1℃)、托盘天平、可调式电炉、高压灭菌锅、吸管、广口瓶或三角瓶(500mL)、玻璃珠(直径为5mm)、平皿(皿底直径为9cm)、试管(18mm×200mm)、试管架、放大镜、菌落计数器、酒精灯、均质器或乳钵、灭菌剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、玻璃蜡笔、登记簿、不锈钢勺等。
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(三)培养基和试剂
成分: 蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。
制法: 将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠溶解于蒸馏水中,加入15%氢氧化钠溶液2mL,~。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。
(1)储存液
成分: 磷酸二氢钾34g、1mo1/L氢氧化钠175mL、蒸馏水540mL。
制法: 磷酸二氢钾溶解后,用1mo1/L氢氧化钠,,再加蒸馏水至1000mL,经121℃,15min高压灭菌后储于冰箱内作为原液备用。
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(2),加蒸馏水至1000mL,分装每瓶100 mL或每管10 mL,经121℃,15min高压灭菌后备用。
%乙醇。
,用1000mL蒸馏水溶解后,分装,高压灭菌。
(四)检验程序见图7-1。
图7-1 菌落总数平板培养计数法检验程序
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(五)操作步骤
见图7-2
(1)以无菌操作,将检样25g(或25 mL)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样在加人稀释液后,最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理lmin,做成1:10的均匀稀释液。
(2)用lmL灭菌吸管吸取1:10稀释液lmL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管混合均匀,做成l:100的稀释液。
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(3)另取lmL灭菌吸管,按上项操作顺序,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支lmL灭菌吸管。
(4)根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移lmL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
(5)稀释液移人平皿后,应及时将凉至46℃的肉汤蛋白胨琼脂培养基(可放置50℃水浴保温),倾注入平皿内,约15mL,并迅速转动平皿使之混合均匀。
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图7-2 样品稀释程序
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待琼脂凝固后,翻转平皿,置37℃温箱内培养24h(肉、水产品,乳和蛋晶为48h)。
培养后取出,用肉眼或放大镜检查,记录各平板的菌落数目,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。再乘以稀释倍数,即得每克或每毫升样品所含菌落数。
到达规定培养时间,应立即记数。如果不能立即记数,应将平板放置于0~4℃,但不要超过24h。
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(1)平板菌落数的选择选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准,一个稀释度使用两个平板的平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,则可计半个平板后乘2以代表全部平皿菌落数。
(2)稀释度的选择
①应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表7-1例1)。