文档介绍：第二十八章食品功能性成分的测定
本章要点
低聚糖的测定方法
大豆异黄酮的测定方法
总皂苷的测定方法
褪黑素的测定方法
肉碱的测定方法
免疫球蛋白IgG的测定方法
EPA和DHA的测定方法
超氧化物歧化酶的测定方法
总谷胱甘肽(GSH)含量的测定方法
-胡萝卜素含量的测定方法
低聚糖——低聚果糖和异麦芽低聚糖
的测定方法(高效液相色谱法)
本方法适用功能性食品中低聚糖的检测。
一、方法提要
低聚糖各组分用高效液相色谱法分离并定量测定,以乙腈、水作流动相在碳水化合物分析柱上糖的分离顺序是先单糖后双糖,先低聚后多聚,以示差折射检测器检测。
低聚糖的检测有外标法和内标法,但由于功能性食品一般只需报告低聚糖的总量,故可用厂家提供的基料作对照样,在相同的分离条件下以面积比值法求出样品中低聚糖含量。
二、仪器
:Waters HPLC,510泵,410示差折射检测器,数据处理装置。
。
()。
三、试剂
(色谱纯)。
(三蒸水并经Milli-Q超纯处理)。
:低聚糖难得纯品,故可用厂家提供的基料。
为对照品。
低聚果糖(haride):国产:一般含蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)。
液状基料:含量约>35%。
固状基料:含量约>50%。
进口:从蔗果三糖(GF2)至蔗果七糖(GF6)有液状、固状,30%~96%多种规格。异麦芽低聚糖:有液状、固状,一般含量>50%。
根据保健食品所强化的品种,准确称取低聚果糖或异麦芽低聚糖基料分别于100mL的容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,配成低聚果糖约5~10mg/mL或异麦芽低聚糖约5~10mg/mL的对照样品溶液。
四、测定步骤
胶囊、片剂、颗粒、冲剂、粉剂(不含蛋白质)的样品
(由于低聚糖原料含量不一,样品中的强化量也不同,所以样品的称量应控制在使低聚糖最终的进样浓度约5~10mg/mL为宜),于100mL容量瓶中,加水约80mL于超声波振荡器中振荡提取30min,加水至刻度,摇匀,。
奶制品(含蛋白质)的样品
准确吸取50mL于小烧杯中,加25mL无水乙醇,加热使蛋白质沉淀,过滤,滤液经浓缩并用水定容至25mL刻度。
饮料或口服液样品
准确吸取一定量的样品,加水稀释,定容至一定体积使低聚糖的最终进样浓度约5~10mg/mL。
果冻或布丁类样品
果冻类样品先均匀搅碎,称量,加适量水并加热至60℃,然后用水稀释至一定体积。
布丁类样品可按奶制品处理。
色谱柱:×300mm。
柱温:35℃。
流动相:乙腈+水(75+25)。
流速:1~2mL/min。
检测器灵敏度:16X。
进样量:10~25μL。
取样品处理液和对照品溶液各10~25μL注入高效液相色谱仪进行分离。以对照品峰的保留时间定性,以其峰面积计算出样液中被测物质的含量。
低聚糖的分离顺序为:
低聚果糖:果糖+葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖(GF2)……蔗果七糖(GF6)
异麦芽低聚糖:葡萄糖、麦芽糖、异麦芽糖、潘糖(pentose)、异麦芽
三糖、异麦芽四糖、异麦芽四糖以上。
五、结果计算
低聚糖占总糖的百分含量
因为各组分均为同系物,所以可用面积归一法计算低聚糖各组分总面积值及各组分占固形物(总糖)的百分含量。
低聚果糖占总糖%=
式中 Sl——果糖+葡萄糖的峰面积;
S2——蔗糖的峰面积;
S3+……S7——蔗果三糖(GF2)……蔗果七糖(GF6)的峰面积。
异麦芽低聚糖占总糖%=
式中 Sl——葡萄糖的峰面积;
S2——麦芽糖的峰面积;
S3+……S7——异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖、异麦芽四糖
以上的峰面积。
注:以上数值均可在积