文档介绍：实验六酵母菌的血球计数板计数法数法一、实验目的学****血球计数板计数法使用的原理与方法,并学****区别死活酵母的方法。二、基本原理测定微生物数量方法很多, 通常采用的有显微镜直接计数法、平板计数法、细胞和原生质体总量计测法等三类。镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌抱子可采用血球计数板;一般细菌则采用彼得罗夫?霍泽( Petroff Hausser )细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,故细菌不易看清。血球计数板是一块特制的厚载玻片, 载玻片上有 4 条槽而构成 3 个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个方格网(图 l8) 。每个方格网共分 9 大格,其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。常见血球计数板的计数室有两种规格一种是 16× 25型, 称为麦氏血球计数板, 共有 16 个中方格, 而每个中方格又分成 25 个小方格。另一种是 25× l6 型,称为希里格式血球计数板,共有 25 个中方格,而每个中方格又分成 16 个小方格。但是不管哪种规格的血球计数板其计数室的每个大方格均由 400 个小方格组成(图 19)。每个大方格边长为 1mm ,则每一大方格的面积为 1mm 2 ,每个小方格的面积为 1/4000mm 2, 盖上盖玻片后, 盖玻片与计数室底部之间的高度为 , 所以每个计数室(大方格)的体积为 3 ,每个小方格的体积为 1/4000mm 3 。使用血球计数板直接计数时, 先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量,再换算成每 ml 菌液(或每 g 样品)中微生物细胞的数量。图 18 血球计数板的构造 A 、平面图(中间平台分为两半,各刻有一个方格网) B 、侧面图(中间平台与盖玻片之间高度为 的间隙) 三、实验器材 1 .菌种酿酒酵母( haromyces cerevisiae )菌悬液; 2 .仪器显微镜,血球计数板; 3 .材料盖玻片,吸水纸,尖嘴滴管。 4 .染料美兰染液图 19 血球计数板计数网的区分和细分格四、操作步骤和内容 1 .视待测菌液浓度,加无菌水作适当稀释,以每小格的菌数可数为度。应当稀释到每各中格大约 30 个左右的酵母, 60-100 左右的细菌。准确计算稀释倍数。 2. 血球计数板使用前应当清洗干净,用 95% 酒精棉球擦洗, 切勿用火焰烘干。取洁净的血球计数板一块,在计数室上盖上一块盖玻片。 3 .将酵母菌液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的边缘滴入一小滴(不宜过多) ,使菌液沿两玻片间自行渗入计数室,勿使产生气泡,并用吸水纸吸去多余菌液, 避免盖玻片上浮。也可以将菌液直接滴加在计数室上, 然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。 4 .静置约 5min ,先在低倍镜下找到计数室后,再转换高倍镜观察计数。 5. 计数时用 25 中格的计数板, 要按对角线方位, 取左上、左下、右上、右下、中央的 5 个中格中的菌数。如果是 16 中格计数板,计左上、左下、右上、右下四格的菌数。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置, 要在不同的焦