微生物检测菌落总数测定方法.doc

文档介绍：方案一微生物学检验菌落总数的测定 1 原理微生物活体数量的测定方法, 常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液,再取一定的稀释液接种,使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内, 最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克(或 mL )样品中的活菌数量。 2 材料和仪器 恒温培养箱: 36℃±1℃。 冰箱: 2~5℃。 灭菌锅。 超净工作台。 均质器。 漩涡振荡器。 微波炉。 天平:感量为 。 平皿:φ 90mm 。 锥形瓶 250ml,500ml 。 微量移液器一套(量程分别为: 0~ 1000 μl,0~ 100 μl,0~ 10μl )及吸头。 涂棒。 精密 pH 试纸。 酒精灯。 指形瓶。 剪刀,镊子。 牛皮纸。 医用酒精及脱脂棉。 橡胶手套。 记号笔。 3 检验程序菌落总数的检验程序见下图。检样 10g 样品+90mL 无菌生理水,均质↓↓方法①↙↘方法② 10 倍系列稀释选择至少 3 个适宜样品稀释均液↘↙↓↓计算菌落总数 4 操作步骤 4 .1 培养基和试剂的配制 平板计数琼脂培养基( pl) 培养基(最常用) 蒸馏水 1L pH ~ 将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节 pH 值,分装锥形瓶中, 121 ℃高压灭菌 15 分钟。 无菌生理盐水的配制: 称取 氯化钠溶解于 1000mL 蒸馏水中, 121 ℃高压灭菌 15 分钟。 样品的稀释: 称取 25 g样品置盛有 225 mL生理盐水的无菌均质杯内, 8000 r/ min ~ 10000 r/ min 均质1 min ~2 min 。制成 10 -1, 10 -2, 10 -3, 10 -4, 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 稀释液。 根据对样品活菌数量的估计,选择 3~4 个适宜稀释度的样品均液(比如 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 稀释液)。 平板接种与培养接种方法 1: 用 1mL 微量移液器吸取不同稀释度的菌悬液 1mL 于一个无菌培养皿中(每个稀释度做三个重复) ,再在培养皿中分别倒入 10~ 15mL 已融化并冷却至 45~50 ℃的培养基,盖好平皿盖子, 趁热轻轻转动培养皿, 使菌液与培养基充分混合均匀, 冷凝后在恒温培养箱中倒置培养 24 ~28h,培养温度为 36℃±1℃。同时以稀释液无菌生理盐水作空白对照。注:比如 1000 亿 CFU 样品稀释梯度可选择为: 10 -8, 10 -9, 10 -10。接种方法 2: 用 1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 mL稀释液均液于计数培养基平板上,将稀释液涂布均匀, 吸附, 在恒温培养箱中倒置培养 24~ 28h, 培养温度为 36℃±1℃。同时以无菌生理盐水作空白对照。(计算时需要把 的倍数也计算在稀释倍数内) 注:比如 1000 亿 CFU 样品稀释梯度可选择为: 10 -7