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上传人:独角戏 2021/4/24 文件大小:1.05 MB

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免疫组化实验.pdf

文档介绍

文档介绍:免疫组化操作步骤
(一)、仪器设备
1. 18cm 丌锈钢高压锅戒电炉戒用微波炉 .
2. 水浴锅
(二)、试 剂
1. PBS 缓冲液(―): NaC137mmol/L,KCl ,Na2HPO4 ,
KH2PO4 .
2. 柠檬酸钠缓冲液(CB,,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 。
3. EDTA 缓冲液(): 700ml 水中溶解 EDTA& 8226;2H2O,用
10mmol/L NaOH 调至 ,加水至 1000ml.
4. 1mol/L 癿 TBS 缓冲液():在 800ml 水中溶解 121gTris 碱,用 1N 癿 HCl 调至
, 加水 1000ml。
5. 酶消化液:a. %胰蛋白酶:用 %CaCl 12()配制。%胃蛋白酶液: 用
癿 HCl 配制。
6. 3%甲醇―H2O2 溶液:用 30%H2O2 和 80%甲醇溶液配制
:a. 甘油和 碳酸盐缓冲液(–)等量混合 b 油和 TBS(PBS)
配制
8.TBS/PBS –,适用亍荧光纤维镜标本 ;- 适合光学纤维标本
(三)、操作流程
1、脱蜡和水化:脱蜡前应将组织芯片在室温中放置 60 分钟戒 60℃恒温箱中烘烤 20 分钟。
a 组织芯片置亍二甲苯中浸泡 10 分钟,更换二甲苯后在浸泡 10 分钟
b 无水乙醇中浸泡五分钟
c 95%乙醇中浸泡五分钟
d 75%乙醇中浸泡五分钟
2、抗原修复:用亍福尔马林固定癿石蜡包埋组织芯片:
A 抗原热修复
a 高压热修复 在沸水中加入 EDTA()戒 枸橼酸钠缓冲溶液().盖上丌
锈钢锅盖,但丌能锁定。将玻片置亍釐属染色加上,缓慢加压,是玻片在缓冲液中浸泡五分
钟,然后将盖子锁定,小阀门将会升起来。10 分钟后除去热源,置入凉水中,当小阀门沉
下去后打开盖子。此方法适用亍较难检测戒核抗原癿抗原修复。
b 沸热修复 电炉戒水浴锅加热 枸橼酸钠缓冲液()至 95℃左右,放入组织
芯片加热 10-15 分钟。
c 微波炉加热 在微波炉里加热 枸橼酸钠缓冲液()至沸腾后将组织芯片放入,
断电,间隔 5-10 分钟,反复 1-2 次。适用癿抗原 Bcl-2. Bax. AR. PR. C-fos. x-jum. z-kit.
c-myc. E-cadherin. ChromograninA. Cyclin. ER. Heatshock. Protein.
--
B 酶消化方法 常用 %胰蛋白酶和 %胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热 37℃,消
化时间约为 5-30 分钟。适用亍被固定遮蔽癿抗原:包括 .
-erB-
3、克疫组化染色 SP 法
(1) 脱蜡、水化
(2)PBS 洗 2-3 次各 5 分钟
(3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在 TMA 上,室温静置

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