文档介绍：实验四免疫学实验
一、机体体液免疫功能测定
（一）凝集反应
【目的】
了解玻片凝集试验、试管凝集试验及胶乳间接凝集抑制试验的操作过程、结
果分析和实际应用。
【原理】
颗粒性抗原 ( 细菌、细胞等) 与相应抗体在一定电解质存在的条件下发生特异
性结合并出现肉眼可见的凝集块的现象称为凝集反应。凝集反应既可用已知抗体
检查和鉴定未知的抗原 ( 如鉴定细菌 ) ，也可用已知抗原检查血清中相应的抗体；
既可用作定性检测，又可用于定量检测。
凝集反应分两种。一种是颗粒性抗原与抗体直接结合出现的凝集现象，称为
直接凝集反应；另一种是将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的载休颗粒表面，
再与相应的抗体结合而出现的凝集反应，称为间接凝集反应。如将抗体吸附于载
体颗粒表面，再与相应的抗原结合而出现的凝集反应则称为反向间接凝集反应。
1 、玻片凝集反应
【材料】
伤寒诊断血清、伤寒沙门菌及大肠埃希菌培养物、载玻片、生理盐水等。
【方法】
①取载玻片 1 张，左侧加生理盐水 1 滴，中间
及右侧各加伤寒诊断血清 1 滴；
②用接种环取伤寒沙门菌培养物少许，分别
左中右
与盐水及中间的伤寒诊断血清混匀。同法取大肠
埃希菌培养物与右侧伤寒诊断血清混匀；
③轻轻摇动玻片 1～2min 后，观察结果；
生理盐水伤寒诊断血清伤寒诊断血
④观察后，将玻片直接投入消毒缸，不要冲
＋＋＋
伤寒沙门菌伤寒沙门菌大肠埃希
洗，以防污染。
【结果】
出现凝集物者为阳性反应，均匀混浊无凝集物
者为阴性反应。
【注意事项】玻片凝集反应
①用接种环取一种试剂前后均需进行烧灼，不可有杂菌污染以及前一试剂残
留。
②用接种环取细菌时应先烧灼灭菌，待冷却后方可挑取细菌。
③用接种环加细菌于血清中后，应先烧灼接种环，再取细菌加入另一血清中。
【结果分析】
左：
中：
右：
应用：
2、试管凝集反应
试管凝集反应为半定量试验，常用已知抗原检测患者血清中相应抗体的效
价。
【材料】
伤寒诊断血清 ( 抗体) 、伤寒菌液( 抗原) 、生理盐水(NS)、刻度吸管、试管等。
【方法及结果】见表
试管凝集反应的方法
试管 1 2 3 4 5 6
7
生理盐水(ml)

伤寒诊断血清(ml) .. ＋
NS
血清稀释倍数 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
对照
菌液(ml)

血清最终稀释倍数 . 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640
对照
56 ℃ 4 小时,4 ℃冰箱过夜 , 次日观察结果
结果
效价
【结果判断】见表
手持试管，对光观察管内液体混浊度及管底沉淀物之性状。
试管凝集反应结果的判读
记录符号上层液体管底凝集物
++++ 完全澄清凝块多而明显，全部沉于管底
+++ 微混浊凝块显著，大部分沉于管底
++ 稍混浊凝块较明显，中等沉于管底
+ 混浊凝块不太明显，少许沉于管底
- 混浊细菌均沉积于管底，呈小园点状，不见
凝块
凝集效价的判定：呈 “++”阳性反应的最高稀释倍数为该血清的效价 ( 也称滴
度) 。对照管 ( 第 7 管) 应为阴性。
【注意事项】
观察结果时，先看生理盐水对照管，可见管底有圆点状细菌沉积，边缘整齐，
轻摇则分散为混浊的菌液，似烟雾状。
【思考题】
试管凝集反应的临床应用：
（二）沉淀反应
可溶性抗原 ( 如血清、细菌浸出液、 ***等) 和相应抗体结合，在适量电解质
存在的条件下，经一定时间，二者在比例适当时形成肉眼可见的沉淀物，称为沉
淀反应。参与反应的抗原称为沉淀原，而相应的抗体称为沉淀素。由于沉淀反应
的抗原多系胶体溶液，沉淀物主要是由抗体蛋白所组成，为获得抗原与抗体的适
宜比例，操作中通常稀释抗原而不稀释抗体，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的
效价。
本实验介绍琼脂扩散试验和对流免疫电泳。
【目的】
了解单扩、双扩及对流免疫电流的原理、操作步骤及临床应用。
1、单向琼脂扩散试验：
【原理】
琼脂属于大分子多糖， 100℃时熔化，低于 45℃时凝固而形成网状结构，并
能允许抗原抗体的在其中自由扩散。琼脂扩散试验是指可溶性抗原与相应抗体在
琼脂内扩散，若二者对应且比例合适，则出现白色沉淀物。
单向琼脂扩散试验系定量试验，通常以已知抗