文档介绍：北京正旦国际科技有限责任公司 GST 标签融合蛋白纯化试剂盒一、原理含有谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白质或多肽可以与谷胱甘肽-琼脂糖凝胶结合, 用适当的缓冲液冲洗去除杂蛋白后,再用还原型谷胱甘肽洗脱回收含有谷胱甘肽S-转移酶(GS T)的融合蛋白质或多肽。二、试剂盒组成 A. 层析柱 1根 B. 谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B 4ml或10ml C. 还原型谷胱甘肽 1g或2g 三、纯化方法或5ml 谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B 装柱,凝胶自然沉降。 -10 倍柱床体积的水洗层析柱,再用5 倍柱床体积的结合缓冲液(20mmol/L磷酸盐缓冲液,200mmol/L NaCl,pH )平衡层析凝胶柱。 3. 将适量细胞裂解液(20mmol/L 磷酸盐缓冲液,200mmol/L Na Cl,pH )12000g 离心, 取上清,上样,。 -10 倍柱床体积的结合缓冲液洗层析柱,。 (50mmol/L T ,, 5mmol/L 还原型谷胱甘肽)进行洗脱,,收集各洗脱峰。(还原型谷胱甘肽的浓度可以依据不同的融合蛋白进行调整)。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析融合蛋白纯度。四、保存在20%乙醇中,4℃下保存一年。北京正旦区生命园路33号邮编:102206 电话:010-807027777-1567 传真:010-80705155 公司网站:.com 电子邮箱: zdmarket@ 1 北京正旦国际科技有限责任公司 His 标签融合蛋白纯化试剂盒一、原理含有多聚组氨酸的蛋白质或多肽可以与 Ni 2+螯合物结合,用适当的缓冲液冲洗去除杂蛋白后,再用可溶性竞争性螯合剂咪唑洗脱回收含有多聚组氨酸的靶蛋白。二、试剂 A. 层析柱 1 根 B. N i 2+ 螯合琼脂糖凝胶4B 4ml或10ml C. 硫酸镍 5g或10g D. 咪唑 6g或12g E. EDTA 10g或20g 三、纯化方法 1 .取 2ml 或 5ml Ni 2+螯合琼脂糖凝胶4B装柱,凝胶自然沉降。倍柱床体积的水洗层析柱,再用5 倍柱床体积的结合缓冲液( 20mmol/L 磷酸盐缓冲液,500mmol/L NaC l,pH )平衡层析凝胶柱。 3. 将适量细胞裂解液( 20mmol/L 磷酸盐缓冲液,500mmol/L NaCl ,pH )12000g 离心,取上清,上样,。 -10 倍柱床体积的结合缓冲液洗层析柱,。 ,,收集各洗脱峰。(咪唑的浓度一般为10、20、50、100、150、200mmol/L,依据不同融合蛋白而不同)。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析组氨酸标签融合蛋白纯度。四、再生 1 .用 2倍柱床体积的乙酸洗层析柱,再用 5倍柱床体积的水洗层析柱。 2 .用 5倍柱床体积 50%乙醇层析柱,再用 5倍柱床体积的水洗层析柱。 3 .用 5倍柱床体积的 EDTA 洗层析柱,再用 5倍柱床体积的水洗层析柱。 4 .用 2倍体积的硫酸镍洗层析柱,再用 5倍柱床体积的水洗层析柱。五、保存在 20% 乙醇中, 4 ℃下保存一年。北京正旦区生命园路33号邮编:102206 电话:010-807027777-1567 传真:010-80705155 公司网站:.com 电子邮箱: zdmarket@ 1 北京正旦国际科技有限责任公司 1 e-pfu DNA 聚合酶说明书规格: 100U / 500U 一、产品说明 e-pfu DNA 聚合酶具有高保真性,热稳定性好的特点。 e-pfu DNA 聚合酶扩增产物不适用于进行 TA 克隆。二、试剂 1. e -pfu DNA 聚合酶 100u,500u () 2. 10× PCR 缓冲液 200μl,1ml 三、方法反应举例: DNA 模板