文档介绍：基因工程及其应用上课用
1、定义：
一、基因工程
原理？
水平?
又叫基因拼接技术或DNA重组技术。一种生物的某种基因提出，修饰改造，放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。
基因重组
目的？
对象？
DNA分子水平
基因
定向地改造生物的遗传性状
第1页/共35页
二基因操作工具
基因的“剪刀”
基因的“针线”
基因的运输工具
——限制性内切酶
——DNA连接酶
——运载体
思考：三种工具是不是全是酶？
第2页/共35页
1、基因工程的“ ”
指“ 限制性核酸内切酶 ”
主要在原核生物中
一种限切酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定切点切割
磷酸二酯键
切点:
分布：
特点:
“ ”
第3页/共35页
G A A T T C
C T T A A G
C T T A A
G
A A T T C
G
EcoRI：大肠杆菌的一种限制酶。能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。
结果：产生两个粘性末端（碱基互补配对）
剪开脱氧核苷酸间的磷酸二酯键
第4页/共35页
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
练****使用EcoRI 剪切目的基因
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
目的基因
黏性末端
讨论：要想从DNA上切下目的基因，应切几个切口？产生几个黏性末端？
2个切口
4个黏性末端
第5页/共35页
——DNA连接酶
DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。
磷酸二酯键
磷酸二酯键
2、基因工程的“ ”
第6页/共35页
——DNA连接酶
DNA连接酶可把相同黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。
磷酸二酯键
磷酸二酯键
2、基因工程的“ ”
第7页/共35页
DNA连接酶连接两个DN***段上的磷酸二酯键
甲片段
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
乙片段
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
形成重组DNA分子
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
碱基互补配对形成氢键
第8页/共35页
3、基因工程的 “运载体 ”
常用的有质粒、噬菌体、动植物病毒等
----能与目的基因连接
—检测目的基因是否导入到受体细胞
作为运载体必须具备哪些条件？
第9页/共35页