文档介绍：菌种操作规程
（Master Operation Procedure for ARA Production Strain）
CA/WA001—2004版
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1目的
建立菌种操作规程，确保菌种保藏、自然选育、生产供种操作规范性，提供优质高产的生产菌种。
2 范围
生产一部菌种组。
3 责任
菌种组操作人员负责本操作规程的实施。
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安瓿管的制备
空白安瓿管的制备
安瓿管有三种：手榴弹形、球形、直形。任意选取一种放于重铬酸钾-浓硫酸溶液（100g/mL）中浸泡10h，然后取出用自来水反复冲洗多次，最后用蒸馏水洗二次，烘干。将写有菌种编号及制备膜的标签放入安瓿管内，将有字的一面向管壁，塞上棉塞，121℃灭菌1小时。
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脱脂牛奶的制备
将买来的新鲜牛奶倒入离心管中以3000转/分离心15分钟，去掉上层的脂，下层即为脱脂牛奶。
脱脂好的牛奶倒入试管（Φ18×200mm）或250mL三角瓶中，置消毒锅中灭菌，灭菌温度110℃、时间20分钟。
按10%的抽样率抽取灭菌好的脱脂牛奶作无菌实验，每支肉汤倒入约1mL左右的牛奶。然后置37℃恒温间培养48h观察肉汤变化情况，判定是否染菌，如无染菌，即可使用。
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孢子悬浮液的制备
将经过摇瓶考察指标符合要求对照的斜面孢子，制成高浓度的孢子悬浮液，用无菌的毛细吸管或注射器将菌液分装于安瓿管底部，～
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预冻及速冻
灌装好的安瓿管置2～5℃冰箱预冻1h，然后置-30℃温度下速冻1h后取出，置真空干燥器内。
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真空干燥
将装在安瓿管的真空干燥器接入真空泵上，在-15℃温度下，抽真空6～8h。然后再在室温抽4h。
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封口
将抽好的安瓿管在酒精喷灯上进行熔封（边抽真空边封口）。
安瓿管的泄漏测定
用高频火花测定仪进行测定。测定方法：将测定仪照着安瓿管管壁打一枪，如果各壁呈紫色的光即为合格，如果没有颜色，呈白光，即是不合格产品。
保藏
合格安瓿管置2～5℃冰箱保藏，保藏期为1～10年。
记录
安瓿管在保藏过程中应控制温度，每天查看温度并填写《温度、湿度原始记录》，在使用过程中应填写《安瓿管使用记录》。
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砂土管的制备
砂的处理
普通黄沙用稀酸（1N的HCL或H2SO4）或稀碱（1NNaOH）浸泡12小时后,倒去酸水，用自来水充分冲洗至PH中性，烘干后用磁铁吸去铁屑，经60目筛过筛后备用。
土的处理
取离地面1公尺以下的黄土，（不含有机质）打碎，加适量水充分搅拌，将上层混浊液倒出静置（下层成块的土弃之）使土沉淀，倒出上层清液后，再加适量水搅拌，沉淀。如此反复洗涤直到PH呈中性。沉淀出来的土烘干，碾碎，经80目筛过滤后备用
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砂土管的制备方法
将处理好的沙和土按2：1(或其它比例)混合均匀，分装于10mm×100mm硬质玻璃试管中，，用新做的棉塞塞好，并外包牛皮纸，123～125℃湿热灭菌30min，间歇灭菌6次，每隔24小时一次，最后一次消好后置135～145℃烘箱干烘一小时，然后进行抽样无菌检查，每10支砂管抽1支，将沙土倒入肉汤培养基中，36～38℃培养48小时，若仍有杂菌，则需要全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。
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