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人胰腺癌细胞系兄琢龈上赴群细胞的分离及生物学特性研究·论著·自白血病和乳腺癌干细胞成功分离之后,研究人员黄凤婷张世能黄奕俊岘淑莉钟娃左海军庄晓虹【摘要】【縋肿瘤干细胞理论认为,肿瘤细胞具有异质性,在肿瘤组织中存在数量极少的瘤细胞拥有干细胞样的特性,具有自我更新、无限增殖和多向分化的潜能,在肿瘤的发生、发展、预后及复发中起着关键性作用。相继在鼻咽癌和肝癌等肿瘤中分离并鉴定出肿瘤干细胞‘¨1狙芯恐荚诜掷肴艘认侔┫赴抵械闹瘤干细胞样侧群,赴⒔一步研究其生物学特性。材料与方法~、细胞的分选取对数生长期的人胰腺癌细胞系、目的从人胰腺癌细胞系中分离肿瘤干细胞样侧群,赴并进一步研究其生物学特性。方法细胞常规培养后应用蚉旧ā⒂ü饧し⒘魇较胞仪检测并分选细胞,ḿ觳庀赴钚裕魇较赴欠治龈上赴曛疚顲的表达,克隆平板测定细胞克隆形成能力,检测细胞易宄稍盙蛋白表达。结果人胰腺癌细胞系中细胞比例为ィ赏耆ū晃撩鬃瓒稀E嘌螅瑂赴腏踔滴,克隆形成率为±ィ珻Q粜月饰ィ灾哂诜莝赴..ィィ籗赴鸄表达也较非细胞强。结论胰腺癌细胞系存在细胞。【关键词】胰腺肿瘤;肿瘤于细胞;侧群细胞岩籺,琙猲珽:.,,.甅%,..%,,±ィ猄..基金项目:广东省自然科学基金作者单位:、张世能、瞻淑莉、钟娃、左海军、庄晓虹恢猩酱笱е猩揭窖г药理教研事妻瓤通信作者:张世能,簊畉·猲琀猯琙,瓺,印琒猄,:.,.%,瓹籘籗
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入终浓度为巍暗暮怂峤岷先玖螲琍洗危偌尤隤。生堡堕鳇瘤苤壶塑祧咝恰炱凇阞』堕塑旱坚些和本院消化实验室传代培养赴实验前一天换液,实验日弃培养液,次,甆.%胰蛋白酶混合液消化细胞,加入含血清的培养液中止消化,吸管反复吹打,以含的培养基重悬成痬南赴骸一组加入终浓度为/奈撩拮抗剂硪蛔椴患游撩祝娣跤继续培养依据肿瘤干细胞因染料外排不发出荧光的原理,利用流式细胞仪珼,úǔ问分选细胞。二、细胞增殖实验新鲜分选的、非赴直鸾又钟孔板上,每孔鱿赴寤,加入含/、⑶嗝素痬疵顾/的/嘌基培养E嘌崾靠准尤隡穕/绦跤⌒奈啄谏锨液,每孔加入穕,震荡远副仪上测值。以栉?瞻锥哉眨验重复巍三、细胞泶锛觳分选的和赴嘌⒁让赶⒗胄收集细胞、次后,分别以赴考入タ孵育,再加入鼠·或对照,流式细胞仪检测。,。荧光值。四、克隆形成实验分选的和赴直鸺尤孔板,每孔鱿赴捎肈疐培养基℃培养。当/克隆时终止培养,弃培养液,遍,加纯甲醇固定。弃固定液,加适量结晶紫染色,然后用郝慈ト旧海掌干燥并计数克隆数。五、易宄稍盙猙珹鞍妆泶锛觳常规提取细胞蛋白质,行,、统计分析计量资料用面表示,采用煅椋煅楸曜结一、不同人胰腺癌细胞系中细胞比例从人胰腺癌细胞系、和中均可分离出细胞,比例分别为ァ.%和ィ患尤胛撩缀螅捎谄渚哂修卓玖螲贸鱿赴庾饔茫述窒赴鸖壤直鸾滴、ズ.%R虼耍狙芯垦≡馭赴鑫=步分析对象。二、细胞增殖变化细胞培养保瑂赴喑是蛐涡∽刺赴喑侍谧刺赴煺钩仕笮危慌嘌后,细胞及赴侍谧刺图。细胞及赴で呒。细胞培养后进入对数生长期,:捍:§和、果图忠认侔┫赴抵械腟壤细胞及赴嘌上下男翁,/、
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三、细胞克隆形成率体外培养忻飨缘目寺⌒纬图,、细胞Ⅲ蛋白的表达细胞