2-PCR基因扩增及扩增产物的回收-课件【PPT演示稿】.ppt

文档介绍：Q&A ?关于标签: 物质描述:名称,浓度, pH值等配制信息:配制人,配制日期等班级(周四 318 或周四佟),组别?关于试剂配制 EDTA( 乙二***四乙酸钠),碱性条件下可溶, 一般每百毫升加 NaOH 约4g Tris -HCl 1mol/L, (25℃) 生化实验室, MilliQ 水(已灭菌, PCR 专用) 生化实验室, 1640 培养基含FBS 10% ,含双抗(Jurkat 细胞专用) 佟丽, 手术器械(已除热源) 佟丽, PCR PCR 基因扩增及其产物回收基因扩增及其产物回收佟丽佟丽 2008 2008 年年9 9月月 25 25日日基因的克隆与表达专题之一基因的克隆与表达专题之一主要内容?目的基因 AKP 的扩增- PCR ?扩增产物的分离鉴定-琼脂糖电泳?扩增产物的回收-胶回收 PCR 产物目的产物琼脂糖凝胶分析目的基因 AKP 的扩增- PCR ?概述?PCR 技术原理?PCR 特点?影响因素与条件优化?关于本次实验 PCR ( Polymerase Chain Reaction )在体外特异性地扩增某个基因。 1993 年诺贝尔化学奖 Kary B. Mullis 概述 Saiki Saiki 使PCR 成为实用的方法 PCR 的种类?常规 PCR ?Touch-down PCR ?RT-PCR ?兼并引物 PCR ?巢氏 PCR ?反向 PCR ?不对称 PCR ?原位 PCR ?RACE-PCR ?免疫-PCR( immuno -PCR) ?MSP ***化特异 PCR ?等等…………?常规 PCR ?RT-PCR PCR 技术原理?高温变性?低温复性(退火) ?适温延伸?适度循环 DNA 模板高温变性: 双链 DNA 在受热后,配对碱基的氢键断裂, DNA 两条链分开成为单链。 95 oC 3’ 5’ TGCATGCAT ATCTTGAAC TAGAACTTG ACGTACGTA 5’ 3’ 5’ TGCATGCAT ATCTTGAAC 3’ 3’5’ TAGAACTTG ACGTACGTA 模板( template ) TGCATGCAT ATCTTGAAC 3’ 5’5’ TAGAACTT G ACGTACGTA 3’ DNA 模板与引物复性(退火) : 引物 Primer ,人工合成的单链 DNA 小片段,碱基顺序分别与所要扩增的模板 DNA 双链的 5’端相同模板模板 ATCTTGAAC 5’3’ ACGTACGTA 5’3’引物引物 40-65 ℃