文档介绍：1 大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO) 酶联免疫分析( ELISA ) 试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用。药品名称: 通用名: 大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO) 酶联免疫分析试剂盒使用目的: 本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中甲状腺过氧化物酶(TPO) 含量。实验原理本试剂盒应用间接法测定标本中大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO) 水平。用纯化的大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的甲状腺过氧化物酶(TPO) 标准品和未知浓度的甲状腺过氧化物酶(TPO) 待检样品, 温育后, 加入生物素标记的抗 IgG 抗体, 再与链霉亲和素-HRP 结合, 形成免疫复合物, 经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲状腺过氧化物酶(TPO) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度( OD 值), 通过标准曲线计算样品中大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO) 浓度。试剂盒组成 1 20 倍浓缩洗涤液 50ml ×1瓶9 标准品 S1( 180 mU/L ) ×1瓶 2 链霉亲和素-HRP 6ml ×1瓶标准品 S2( 120 mU/L ) ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条标准品 S3( 60 mU/L ) ×1瓶 4 生物素标记的抗-IgG 抗体 6ml ×1瓶标准品 S4( 30 mU/L ) ×1瓶 5 显色剂 A液 6ml ×1瓶标准品 S5( 15 mU/L ) ×1瓶 6 显色剂 B液 6ml × 1/瓶 10 密封袋 1个 7 终止液 6ml ×1瓶 11 封板膜 3张 8 样品稀释液 6ml ×1瓶 12 说明书 1份标本要求 1. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。 2. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20 ℃保存,但应避免反复冻融操作步骤 1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。 2. 加样: 分别设空白孔( 空白对照孔不加样品, 生物素标记的抗-Ig G 抗体, 链霉亲和素-HRP , 其余各步操作相同) 、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50μl,在样本反应孔中先加入待测样品 10μl 再加入样品稀释液 40μl (样品最终稀释度为 5倍), 盖上封板膜,轻轻振荡混匀, 37℃温育 45 分钟。 3. 配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用 2 4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 4 次,拍干。 5. 加生物素标记的抗-IgG 抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50μl (空白孔除外)。 37℃温育 30 分钟 6. 洗涤:操作同 4。 7. 加链霉亲和素-HRP : 每孔加入 50μl 的链酶亲和素-HRP ( 空白孔除外), 轻轻振荡混匀, 37℃温育 30 分钟。 8. 洗涤: