文档介绍：第三军医大学
博士学位论文
FGFR3对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
姓名:刘志君
申请学位级别:博士
专业:野战外科学
指导教师:陈林
20070501
怨撬杓涑渲矢上赴晒欠只挠跋炷摘要这两种方式相互协讽、相互依赖、相互辅助的过程。在此过程中,有许多因子参与并背景与目的骨骼的形成和重建是一个由多种生长因子、细胞外基质以及细胞之间相互作用的生理发育过程。其主要通过软骨内成骨和膜内成骨两种方式来完成【俊T谌砉悄诔晒过程中,首先是间充质干细胞的密集,然后依次分化为骨祖细胞和软骨细胞,形成软骨样骨胚,破骨细胞侵入吞噬,血管延伸进入,最后被含有成骨细胞的骨组织取代;但在膜内成骨时,间充质干细胞则经骨祖细胞直接分化为成骨细胞,没有经过软骨形成阶段而直接形成骨【俊D壳捌毡槿衔9切纬珊椭亟ㄊ导噬鲜侨砉悄诔晒呛湍つ诔晒调控着骨细胞的增殖、分化与迁移。近年来的研究表明,成纤维细胞生长因子受体膖擎是骨骼形成和重建过程中的重要调控因子。粲诶野彼峒っ甘芴寮易成员,蛲槐涞贾***砉欠⒂蝗ɑ虻拖隆⒐枪亟诓〖耙坠钦鄣裙趋兰膊目前有关匀砉窍赴牡鹘凇⒂跋斓难芯浚延薪隙啾ǖ溃鏔基因敲除小鼠骨骼过度增长、生长区内软骨细胞的增殖活性增高,提示种迫砉窍赴增殖和分化【5涠猿晒窍赴男纬桑约霸诔晒窍赴姆只朐鲋彻讨械淖饔茫尚有待进一步阐明。等人在研究中发现δ茉銮啃∈舐焯崆案苹⑾关节茜素红染色显示骨领增加、成骨细胞分化相关基因骨桥蛋白,⒐钙素,牍橇琌在长骨骨小梁处表达增强,提示参与成骨细胞的分化【俊W罱黇瓼热嗽谘芯恐蟹⑾諪基因敲除小鼠的骨皮质变薄,比正常小鼠更易于骨折,且骨髓间充质干细胞琁逋獬晒悄芰ο陆怠】。针对喽蕴匾煨耘涮錐現現的研究亦发现,或蚯贸∈笈咛シ⒂衅诔鱿指苹映佟浚籉第三军医大学博士学位论文’重庆市自然基金重点项目嗪牛篊国家重点基础研究发展规划项目分题项目编号:国家自然科学基金重点项目嗪牛国家自然基金杰出青年基金嗪牛。
线性化、纯化,在脂质体锄本研究采用过表达、显性负调节以及錋扇偶际醺稍的表达,从正反因敲除小鼠成年后可出现小梁骨量的下降,体外分离培养其,发现其矿化能力显著下降们。提示诔晒窍赴只讨衅鹱胖匾5牡鹘谧饔谩是骨组织发育形成和重建过程中成骨细胞分化的主要来源,它们首先分化为成骨祖细胞,再渐次分化为前成骨细胞与成骨细胞。通过干预教制涠訫成骨分化的影响,明确诠切纬珊椭亟ü讨凶饔茫型A俅餐ü稍瘟葡喙丶膊√峁├砺刍 R虼耍狙芯吭诔晒竦胮瓼、畁珼重组腺病毒载体和载体的基础上,将..与分别转染入,从正反两方面观察猿晒欠只曛净駽隒挠跋欤挥τ肍功能增强型小鼠模型,分离培养δ茉銮啃托∈驧鄄炱涮逋獬晒欠只芰Γ徊⒔玀复合盏寂嘌笠浦猜闶笃は拢鄄霧功能增强对体内成骨分化的影响。研究方法与结果两方面观察其对成骨分化标志基因谋泶镉跋臁M崩δ茉銮啃托∈竽P停芯縁功能增强对的体内和体外成骨分化能力的影响,探讨贛晒欠只械淖饔茫2鱂在成骨细胞分化过程中的作用以及应用瘟乒趋兰膊〈蛳禄 V饕=峁缦拢晒菇ú傲藀瓼与瓺刈橄俨《颈泶镌靥濉通过酶切与椒ǚ直鸹袢与显性负调节,∥坏悖刈楹蠼忻盖屑ā线性化并纯化后,将其转化入感受态细胞,扩增后提取质粒。采用盖进行鉴定并测序鉴定重组腺病毒质粒构建正确。将测序正确的重组腺病毒质粒经的介导下,转染细胞进行包装。《境晒Ω腥綡术際赴定二者的表达。结果表明:—重组腺病毒表达载体。鄄斓紽可促进成骨分化标志基因谋泶分别将重组腺病毒..与载体转染入骨髓间充质干细胞。荧光显微镜下可见转染腺病毒后的胞内呈现报告基因产物的绿色荧光;:甜组细胞无第三军医大学博士学位论文
;—:—;瓺镽雡检测虽可检测到和蛋白的表达,但都比对照组低。从正反两方面观察到唤隹上灾岣進淖B***剑铱上灾岣姆胨健瓼功能增强可促进的体内、体外成骨分化能力分离培养δ茉銮啃∈蟮腗┰龊蠼猩で呙杌妗Iで呦示δ茉銮啃∈驧狈诮贤岩吧驧猿ぁT诔晒怯盏际笛榧觳中,钙钴法染色与泶锛觳饩砻鱂功能增强小鼠谋泶镉牖强鼠的矿化结节较对照组多而大。结果均显示:∈┰龊蟮腇功能增强小鼠与脱钙骨基质春吓嘌螅浦猜闶笃は拢鄄炱涮迥诔骨能力。闫峁允荆篎功能增强组细胞复合物形成的新生骨组织比对照组稍大,切片染色结果亦表明δ茉銮孔樾纬傻男律亲橹隙啵踔量杉典型的膜内成骨现象。本研究成功构