文档介绍：第十四章 1. 基本概念: DNA 重组技术、限制性核酸内切酶、回文结构、基因组 DNA 文库、 cDNA 文库、 PC R DNA 重组技术: 应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的 DNA )与载体 DNA 接合成一具有自我复制能力的 DNA 分子——复制子(replicon) , 继而通过转化或转染宿主细胞, 筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一 DNA 分子,也称基因克隆或重组 DNA (binant DNA) 。限制性核酸内切酶: 限制性核酸内切酶(RE) 是识别 DNA 的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类内切酶。回文结构:Ⅱ类酶识别序列特点——回文结构基因组 DNA 文库:存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所有基因组 DNA 片段的集合。 cDNA 文库: 是包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部 mRNA 经逆转录而合成的 cDNA 序列的克隆载体,它以 cDNA 片段的形式贮存该组织细胞的基因表达信息。(其特点: 代表了取材当时所表达基因的总和,不包括那些未表达的基因。 mRNA 分子中不包括内含子及调控序列,所以 cDNA 文库的复杂性要比基因组文库低的多。) PCR: 根据活体细胞 DNA 复制的机理及双链 DNA 在体外可随温度变化发生变性和复性的特点设计的。* 体外高效、快速、特异地扩增目的基因或 DNA 片段的技术. 2. 何谓基因重组技术,简述其基本过程。基因重组技术:应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的 DNA )与载体 DNA 接合成一具有自我复制能力的 DNA 分子——复制子(replicon) ,继而通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一 DNA 分子,也称基因克隆或重组 DNA (binant DNA) 。基本过程: 分:分离目的基因和载体 DNA 。切:用合适的酶切割上述两者,产生匹配的末端。接:连接酶连接目的基因和载体,形成重组 DNA 分子。转:重组 DNA 分子转入受体菌。筛:筛选具有抗药性的阳性克隆。 3. 何谓目的基因,有哪些来源? 应用重组 DNA 技术的目的有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或 DNA 序列, 或是为获得感兴趣基因的表达产物——蛋白质。这些感兴趣的基因或 DNA 序列就是目的基因,又称目的 DNA 。有两种类型: cDNA 、基因组 DNA 。来源: DNA 文库 3. cDNA 文库 (PCR) 4. 解释基因载体,哪些 DNA 可作为基因载体? (质粒) 基因载体定义:为携带目的基因,实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些 DNA 分子。常用载体:质粒 DNA 、噬菌体 DNA 、病毒 DNA * 载体的选择标准: ?能自主复制; ?具有两个以上的遗传标记物,便于重组体的筛选和鉴定; ?有克隆位点(外源 DNA 插入点),常具有多个单一酶切位点,称为多克隆位点; ?分子量小,以容纳较大的外源 DNA 。?在细胞内稳定性高,以便确保重组体稳定传代。* 载体的分类:常用的载体按来源分为:质粒、噬菌体、病毒载体按得到的产物分类可分为:克隆