文档介绍：中国协和医科大学(北京协和医学院)
硕士学位论文
人白细胞介素-23受体(hIL-23R)基因的表达和初步研究
姓名:车昌燕
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:刘力
20080501
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中文摘要区有类似于细胞因子受体特征性P虻膚,一春衔镏械腎膌能人白细胞介素一受体年报道的细胞因子受体,和.╨共同组成一受体复合物,一鞍子砂区、跨膜区和胞内区三部分组成,与一旱陌馇蚝芟嗨疲桓鯪端免疫的三个纤维蛋白原凸δ苡颉T趆一嫌个潜在的惶腔坏悖浒そ识别一的一堑ノ徊⒂胫岷希蒊介导细胞内的信号转导。由于一及其受体与一及其受体在结构上的相似性,所以人们对于一及其受体的功能研究很多是基于对—及其受体的研究进行的。国外已有研究证明一在抗肿瘤方面有一定的作用,而且一基因在慢性赴裥灾琢鲋凶为肿瘤抑制因子,但目前关于一椭琢龅南喙匦陨形从斜ǖ馈N颐乔捌谘芯糠现了在一些肿瘤细胞有一艚右旃固宓谋泶铮壳岸杂趆一墓δ苎芯尚处于初始阶段,对于的功能研究很多正在进行中。本课题包括的研究内容有:首先从外周血单个核细胞中利用一对特异性引物克隆得到人白细胞介素受体一基因,分别构建真核表达载体—和原核表达载体一一卜。真核表达蛋白,并研究其细胞定位及对细胞周期和细胞凋亡的影响。原核诱导融合蛋白表达。用基因工程方法分别构建胞外区、胞内区的原核表达载体,诱导带有昵┑膆一鞍追侄伪泶铮=徊窖芯縣一墓δ茏鲎急浮第一阶段为克隆基因,从外周血单个核细胞中克隆得到的基因,连接于籘载体,用测序正确的籘一瞿0逡椒ɡ┰鰄一直鸸菇ㄕ婧吮泶镌靥錺狹一驮吮泶镌靥在第二阶段的工作中,通过将—转染和方法检测到其成功表达,用免疫荧光染色对蛋白在细胞和细胞中进行细胞定位;并通过流式细胞术检测了蛋白对细胞周,是球蛋白样结构域和两个细胞因子受体功能域。与一邮煌琁没有邻近膜细胞,用—北京协和医学院硕士学位论文一—猦一
在第三阶段的工作中,通过将一一卜转化大肠杆菌成功地诱导了带有昵┑膆一刈榈鞍住7⑾指玫鞍滓园逍问酱嬖冢在第四阶段的工作中,在大肠杆菌中成功地诱导了带有昵┑膆一刈蛋白的胞内区和胞外区,改变诱导条件臀掠盏后胞内区蛋白有可溶性表达,而胞外区蛋白仍为包涵体表达,为蛋白的纯化和制备针对胞内区的抗体做准备,利用其抗体可以研究与肿瘤的发生的相关性。结论:我们从外周血单个核细胞中克隆得到了的编码区,分别构建了原核表达载体一一卜和真核表达载体—。并分别在大肠细胞中表达了蛋白;通过将转染研究了蛋白表达对细胞周期和细胞凋亡的影响;一δ艿亩嘀制教ā本研究为的功能研究及其与肿瘤的相关性研究提供了依据,但其参与抗肿瘤的机制及能否应用于临床研究,还需要进一步探讨。关键词:细胞因子受体;;蛋白表达;功能研究;期和细胞凋亡的影响。用验证了诤系鞍椎谋泶铮5玫絟一鞍卓固遄隽俗急福杆菌和细胞,通过对的分段表达,得到了可溶性表达的胞内区蛋白;成功搭建了为进一步研究全长北京协和医学院硕上学位论文
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