文档介绍：第25卷第6期 2001年12月水产学报 JOURNALOFFISHERIESOFCHINA , Dec.,2001 文章编号:1000-0615(2002)01-0538-04 斜带石斑白细胞cDNA文库的构建收稿日期:2001-08-02 作者简介:殷志新(1970-),男,河北武邑人,讲师,动物学专业博士研究生。通讯作者:何建国(1962-),男,广东南海人,教授。主要从事水生经济动物病害控制的研究。Tel:020-84110976;E-mail:lsbrc05@ zsu. 殷志新,翁少萍,叶巧真,何建国(中山大学生命科学学院,广东广州 510275) 摘要:用Tripure试剂盒提取斜带石斑白细胞总RNA,反转录合成第一链cDNA,进行长距离PCR,蛋白酶K消化,SfiI酶切,通过CHROMASPIN-400柱,回收大于500bp的cDNA,与KTripIEx2载体连接,体外包装后构建了斜带石斑白细胞的cDNA文库。库容1.******@10 6,重组频率82%,扩增后滴度7.******@10 9pfu#mL -1。插入片断长度500~2300bp,最多的是在750~1000bp范围。本文库可作为筛选斜带石斑细胞因子基因的重要资源。关键词:斜带石斑;白细胞;KTripIEx2;cDNA文库中图分类号:S917; 文献标识码:A ConstructionofcDNAlibraryof Epinepheluscoioidesleukocytes YINZh-ixin,WENGShao-ping,YEQiao-zhen,HEJian-guo (SchoolofLifeScience,ZhongshanUniversity,Guangzhou 510275,China) Abstract:TotalRNAofleukocytesfromorange-spottedgrouper,EpinepheluscoioideswereextractedbyTripure byLD-PCRwithSMARTóOligonucleotideandCDSó,Sfi? digestion,chromatographythroughCHROMASPIN-400,over500bpfragmentswerecollectedandligatedwith ,cDNAlibrarycontaining1.******@10 6privatecloneswasconstructed,in whichmorethan82%,thetiterofthelibrarywas7.******@10 9 pfu#mL -,andmostofthemwerebetween750and1000bp. Thelibrarycanbeusedtoscree