文档介绍：第一节 胆固醇测定
血清中胆固醇包括CE和FC，酯型的CE占70%，FC占30%。CE中的C3的-OH在LCAT作用下，可分别结合亚油酸（43%）、油酸（24%）、软脂酸（10%）、亚麻油酸（6%）、花生四烯酸（6%）、硬脂酸（3%）等脂肪酸结合而成。血清中胆固醇在LDL中最多，其次是HDL和VLDL、CM最少。血清总胆固醇测定方法分为化学法和酶法两大类。
1．化学法
化学法一般包括：①抽提；②皂化；③毛地黄皂苷沉淀纯化；④显色比色四个阶段。代表性的方法有Sperry-Webb法，通过①～④步骤操作过程。常规操作中多采用省去了②、③。或者用省去②、③步骤的Zak-Henly法及省去③步骤的Abell-Kendall法，现将此法作为标准参考方法予以引用。
2．酵法测定
CE在胆固醇酯酶（cholesterolesterase）作用下水解成FC和NFFA，TC再经胆固醇氧化酶（cholesterol oxidase,COD）氧化成△4胆甾烯酮和H2O2。再分别定量O2的消耗或者H2O2的生成量，或者△4胆甾烯酮生成量,以作为TC的定量依据。该法是目前常规的应用方法，快速准确，标本用量少，便于自动生化分析仪作批量测定。
一、Abell-Kendall改良法
1．原理
血清加入醇溶性氢氧化钾，使胆固醇从脂蛋白中分离出来，同时使胆固醇酯加水分解成游离胆固醇，加石油醚振摇、抽提，使胆固醇移入石油醚层，分离并取一定量的石油醚层，蒸发至干，再进行Liebermann-Burchard 显色反应，620nm比色定量。该法可用于基本功训练及组织细胞胆固醇的提取定量。
2．试剂组成
代号-----种类-----浓度-----组 成-----贮存2～8℃-----有效时间
R1-----乙醇----- -----优质纯----- -----
R2-----石油醚----- -----沸点68℃，特级纯----- -----
R3-----水醋酸----- -----分析纯----- -----
R4-----无水醋酸----- -----胆固醇分析用，不含HCI----- -----
R5-----浓硫酸----- -----分析纯----- -----
R6-----KOH液-----33%(W/W)-----KOH10g+H2O20ml----- -----
R7-----乙醇性KOH液----- -----R194ml+R66ml----- -----临用前配制
R8-----Liebermann----- ----- ----- -----配制后
-----Burchard----- -----R420体积+R51体积+R310体积----- -----1h
-----试剂*----- ----- ----- -----内用完
R9-----胆固醇标准液----------胆固醇标准品200mg+R1→100ml-----0-----
*：在三角烧瓶内，加入无水醋酸，于冰水中冷至10℃以下，再慢慢加入浓硫酸，混合，静置10min，又加冰醋酸混匀，备用。
3．操作
图15-1 血清胆