蛋白质含量的测定测定蛋白质含量的方法PPT教案.pptx

文档介绍：会计学
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蛋白质含量的测定测定蛋白质含量的方法
掌握蛋白质含量测定的原理和方法
学会标准曲线的绘制
熟练使用分光光度计
实验目的
测定蛋白质含量的方法
测定蛋白质含量的方法较多
基本上都是根据蛋白质的理化性质和生物学活性建立起来的。
实 验 原 理
二、比色法：利用蛋白质与不同试剂的呈色反应，测定蛋白质的含量，如双缩尿法和酚试剂法（lowry’s method）。
三、紫外分光光度法：利用蛋白质对280nm紫外光有最大的吸光度而采用
一、凯氏定氮法： 根据蛋白质的含氮量来测定蛋白质的含量
公式:每g样品中含氮克数 × ×100
蛋白质
呈色试剂: 酚试剂
磷钼酸--钨酸的混和酸
半胱氨酸、
酪氨酸、
色氨酸
组氨酸
还原型混和酸
(兰色)
蛋白质肽键
碱性
烯醇化
铜离子在pH10条件下螯合在肽键结构中
从而使电子转移到混和酸的显色剂上，
增强了酚试剂对蛋白质的敏感性。
蛋白质与酚试剂呈色深浅与蛋白质的含量成正比，利用蛋白质的浓度与呈色的关系，制备标准曲线，来测定样品中的蛋白质含量。
用已知浓度的标准牛血清白蛋白溶液（浓度为50mg%）配成一系列不同浓度的蛋白质溶液。
取七支试管，编号，按下表操作
实 验 操 作
编号
1 2 3 4 5 6 7
蛋白质含量
（μg）
标准液(ml)
生理盐水ml)
试剂A(ml)
50 100 150 200 250 空白

/ （样品）


混匀，置50℃水浴十分钟，冷却至室温
试剂B

室温放置十分钟
试剂C(混匀)

冷却后在波长650nm条件下比色,测定其光密度值。以空白管调零.
50℃水浴10分钟,
标准曲线的绘制
以蛋白质的含量（μg）为横坐标，光密度值（OD）为纵坐标，绘制出蛋白质含量的标准曲线。
根据样品中的OD650, 从蛋白质标准曲线中找到样品中蛋白质的μg数。