PCR扩增目的基因PPT学习教案.pptx

文档介绍：会计学
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PCR扩增目的基因
一、实验目的
1、掌握PCR扩增DNA的技术与原理
2、学****PCR扩增仪的使用
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二、实验原理
聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等特点。
PCR工作原理类似于DNA的体内复制过程，是将待扩增的DN***段和与其两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸作为引物，引物序列将决定扩增序列片段的特异性和片段长度。
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标准的PCR过程分为三步：
　　（92℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA
　　（37℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
　　（72℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。
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三、实验仪器
PCR扩增仪
台式高速离心机
移液器
高压灭菌后的Eppendorf管（ ）
电泳仪
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四、材料与试剂
1、模板DNA（）：用牙签挑取单 菌落悬浮到50μL的裂解液中（1%TritonX- 100，20mmol/LTris-，2mmol/L EDTA），95℃温浴10min，10000r/min
离心5min，取2μL上清液用于总体积50μL的PCR反应。
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2、TaqDNA聚合酶（5U/μL），10×扩增
缓冲液，dNTP（1mmol/L）：购买。
3、引物（100pmol/L）：设计并合成与目的DNA两侧互补的引物。
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五、实验操作

（1）按序将如下成分混合置于Eppendorf管内
×扩增缓冲液 10μL
×dNTPs 8μL


1μL（10ng）
（）
加水至Ｖ终＝100μL
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（2）手指轻弹Eppendorf管底部
离心2s
（3）加石蜡油50μL封住溶液表面
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