核酸检测技术PPT教案.pptx

文档介绍：会计学
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核酸检测技术
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核酸检测技术
直接对动植物有害生物基因序列和结构进行测定。
核酸的分离纯化
PCR技术
核酸杂交技术
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第1节
核酸的分离纯化
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核酸的分离纯化的原则
保持核酸一级结构的完整性
提高核酸制品的纯度
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技术路线的设计
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破碎细胞的方法
机械 （匀浆、超声破、研磨等）
非机械（化学处理、生化法）
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沉淀是浓缩核酸最常用且高效的方法。
优点
缺点
乙醇
对盐类沉淀少，易挥发除去，不影响后续实验
需要量大，低温操作
异丙醇
需体积小，速度快，一般不需低温长时间放置
易使盐类、糖类与DNA共沉淀；异丙醇难以挥发除去
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核酸浓度检测与完整性测定方法
浓度测定
紫外分光光度法 260nm
荧光光度法 EB荧光
完整性测定
琼脂糖凝胶电泳法：以EB为示踪剂的核酸凝胶电泳结果为依据。
基因组DN***段如发生降解，电泳图呈拖尾状；
完整的或降解很少的总RNA电泳图谱中，三条带的荧光强度积分应呈特定的比值
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问题一：DNA样品不纯
抑制后续酶解和PCR反应
DNA提取常见问题
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DNA提取常见问题
问题二： DNA降解
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