文档介绍：蛋白质组分析蛋白质组(p roteome ) 源于蛋白质( protein ) 与基因组( genome ) 两个词的杂合, 其定义为p roteins expressed bya genome ,即一个基因组表达的全部蛋白质。目前认为蛋白质组的内涵是一个细胞、一类组织或一种生物的基因组所表达的全部蛋白质。蛋白质组学( proteomics )是研究蛋白质组的一门新兴学科, 旨在阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式。蛋白质化学着重于单一蛋白质结构、功能的研究,例如某一种蛋白质或蛋白质亚基的全序列分析, 三维立体结构的确定,这样的结构如何执行功能、在生理上所扮演的角色,以及代谢的生化机制等。蛋白质组学则是研究多种蛋白质组成的复杂系統。 P roteomics 的字尾“-omics ”的意思是“组学”,代表对生物、生命体系研究工作方式的重新定义,也就是说, 蛋白质组学是对基因组所表达的整套蛋白质的分析,其研究对象是多蛋白质混合物的“系统”行为, 而不是“单一组成”的行为。它通过对一个大系统中包含的所有蛋白质进行分离、鉴定、表征和定量,提供关于该系统准确和全面的数据和信息。蛋白质组与基因组通常,一个细胞中表达两类基因: ①必须功能蛋白质的基因; ②行使细胞专一性功能蛋白质的基因。因此,一种生物有一个基因组,但有许多蛋白质组。因此,蛋白质组与基因组在内涵上有很大的不同,主要表现在以下四个方面: (1) 蛋白质组具有多样性图 基因以多种 mRNA 形式剪接的示意图 EXON :外显子,真核细胞基因 DNA 中的编码序列。这样的序列可转录为 RNA 并进而翻译为蛋白质。 P代表磷酸化, sugar 代表糖基化, lipid 代表脂肪酰化, Ub 代表泛素化[3]。(2) 在蛋白质组的研究中,时间和空间的影响都不可忽视(3 )蛋白质间主要以相互作用的形式参与生命活动(4) 蛋白质组研究对技术的依赖性和要求远远超过基因组学蛋白质组学研究对生物分析化学提出的挑战表 目前蛋白质组学分析中使用的分离与鉴定技术[6-12] 技术是否需要标记是否可用于可测定的蛋白质分子量范围动态范围可分离的蛋白点数方法的适用范围 PTM 检测传统的双向电泳方法( 2-DE ) 否是 10 kD ~ 200 kD 1, 000 3, 000 定量困难,方法的重复性差荧光双向差示凝胶电泳( DIGE ) Cy-2 ,3 or5 fluorophores 标记伯氨基是 10 kD ~ 200 kD 10, 000 [6] 3, 000 [7] 适用于检测高表达水平、长半衰期的蛋白质基于反相色谱的二维色谱系统[8]否是>5 kD 的肽或蛋白质 100 2, 500 限于 UV 检测, 未与 MS 联用 LC-MS/M S 多维色谱系统(MudPit) 可 以用 N 14 /N 15 标记氨基酸是蛋白质经酶解后的多肽混合物 10, 000 [9] 872 [10] 适用于较复杂的蛋白质混合物, 进行 MS 分析前需进行分级分离 MALDI- TOF- MS 否是> 10 kD ,实际测定蛋白质经酶解后的多肽混合物 25 不适用通过肽质量指纹图鉴定已分离的蛋白质 SELDI- TOF- MS [11]否是< 40 kD 25 不适用利用蛋白质芯片对生物样品中蛋白质的质量进行分析 I CAT 分析技术以 ICAT 试剂标记巯基是蛋白质经酶解后的多肽混合物无数据 496 [12] 适用于含巯基蛋白质的相对定量分析 cICAT 分析技术以可裂解的 C 12 /C 13 ICA T 试剂标记巯基否蛋白质经酶解后的多肽混合物 10, 000 496 适用于含巯基蛋白质的相对定量分析注: 2-DE , 双向电泳(t wo dimensional electroph o resis ); DIGE , 荧光双向差示凝胶电泳( fluorescence two-dimensional differential gel electrophoresis ); MudPit ,用于蛋白质分离的多维色谱( m ulti-dimensional for p rotein i dentification ); SELDI -MS ,表面增强激光解吸离子化—质谱( surface enhanced laser desorption ionization -MS ); 基质辅助激光解吸离子化—质谱( MALDI -MS , matrix - assisted laser desorption ionization -MS ); ICAT , 同位素标记的亲和标签( isotope-coded affinity tag ) 技术; cICAT , 可裂解的 ICAT (c leavable