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清华大学实验报告
系别：机械工程系班号：mil姓名：« （同组姓名：肖鹤狮胡志鹏） 实验日期：2011年9月25日
微生物实验
第一部分环境中微生物的检测和分离纯化
一、 实验目的
1. 学****并掌握无菌操作技术原理和方法。
2. 学****用稀释涂布法分离微生物。
3. 认识微生物存在的普遍性。
二、 实验原理
（一） 微生物的分离与纯化：土壤是微生物生活的大本营，微生物数量和种类都极其丰富， 因此可以从土壤中分离、纯化得到许多有价值的菌株。微生物常用的分离纯化方法是平板分 离法。为了获得某种微生物的纯培养，一般根据不同微生物对营养、酸碱度、温度好、氧等 的条件要求的不同，供给它适宜的培养条件，或者加入某种抑制剂造成抑制其他菌生长而利 于此菌生长的环境，从而淘汰杂菌，再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微 生物，得到纯菌株。
（二） 平板菌落计数法:将待测样品经过适当稀释之后，使其中微生物尽量分散成单个细胞， 接种到平板上，使之形成单菌落。通过统计菌落数，根据稀释倍数和取样接种量即可换算出 样品中含菌个数。
三、 实验材料和仪器用具
实验材料：
（1） 菌源：10g ±壤
（2） 事先配置好的土壤稀释液（稀释倍数10*） lml
（3） 液态牛肉膏蛋白月东培养基（足够倒满12个）
实验仪器：
取液器（100 Pl,若干），100 y I无菌吸头若干，培养皿（12个）,无菌涂棒，培养箱，酒 精灯，打火机，记号笔
四、 实验步骤
（一） 制作无菌平板
将已经准备好的热的液态牛肉膏蛋白豚培养基用叠皿法均匀倒入灭菌处理过的12个培养皿 中，使每个培养皿都有足够的培养基且内部培养基均匀分布，并且尽量不要让培养基有剩余。 操作需在酒精灯火焰边的无菌环境下进行，动作要快，以免杂菌进入。倒完后待培养皿冷却 凝固，然后倒置待用。
（二） 从土壤中分离微生物
1. 涂布：在酒精灯火焰边的无菌环境中，用100 P I的取液器吸取100 P I的土壤稀释液在平 板上进行涂布分离。注意每涂一次要转动一下培养皿换一个角度继续涂，并使用灭过菌的无 菌涂棒将加入的土壤稀释液涂抹均匀，尽量使之分布均匀。
2. 培养：将涂布后的培养皿放入35°C的培养箱中培养24h,然后取出并观察统计菌落个数。
3. 计数：同组同学分别观察并统计菌落数，相互对照后舍去离群值，计算出平均值。舍去有 较大片菌苔生长的培养皿。若成片的菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，则将 分布均匀的一半计数后乘以2作为菌落数。
（计数公式：土壤中的细菌含量（个/g）=菌落平均数*10*10A5） （三）周围环境中微生物的检测
在牛肉膏蛋白豚平板上作如下实验：
1 •取一个平板，分成6个区域，做好标记。同一个同学（潘霖）用同一指头按如下要求用 力一致均匀进行实验：分别用未洗过的手指头；用自来水打湿的手指头；自来水认真洗过的 手指头；用肥皂或洗手液洗过并冲洗干净1遍的手指头；用肥皂或洗手液洗过并冲洗干净2 遍的手指头；肥皂洗后冲洗干净并用75%酒精棉球擦过消毒后的手指头。分别将以上手指在 分好的六个区上涂抹（所有实验都不用毛巾擦）。
2 •取一个平板，分成4个区域，做好标记。分别用未使用过的餐巾纸，旧纸币，硬币，学 生卡在培养基上拖动2~3次，确保物品均与培养基充分接触。
3 -取一个平板，分区，用100P I取液器分别取100PI的自来水和河水分别涂布在平板上, 并分别用灭菌过的涂棒涂抹均匀。
4 •取两个平板，一个打开皿盖，置实验台上（空气中）lOmin,另-,个按无菌操作要求在 酒精灯火焰边打开皿盖Imino
5•取一个平板，打开皿盖，对着培养基咳嗽（必须使口腔中喷出的气流和飞沫落到培养基 上）。
6•取一个平板，将稍稍打开的嘴唇在培养基上压一下，检查嘴唇上的细菌。
上述实验操作完成后，将培养皿放在35°C培养箱里培养24小时后观察结果。
五、实验结果
（一）从土壤中分离微生物实验的结果
实验结果如图所示，为培养24h后的结果。
1培养基边缘有白色菌落生长，有白色斑点状菌落分布于培养基中
培养基边缘有几块白色菌落，中央菌落呈白色，较集中分布。
培养基边缘有大片白色菌落生长，有
少数斑点状白色菌落分布于培养基中，还有一块较大白色的菌落群。
事实上，三个平板的计数都有困难，最后计数结果是大概有40个左右菌落，换算后得土壤
中微生物含量约为4*10A7个/g。
（二）周围环境中微生物检测的实验结果
实验1