文档介绍：.页眉. 页脚.. 各种 DNA 提取方法提取方法提取方法提取方法一, 基因组 DNA 提取方法制备基因组 DNA 是进行基因结构和功能研究的重要步骤, 通常要求得到的片段的长度不小于 100-200kb 。在 DNA 提取过程中应尽量避免使 DNA 断裂和降解的各种因素, 以保证 DNA 的完整性, 为后续的实验打下基础。主要是 CTAB 方法, 其他的方法还有 1 物理方式: 玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。 2 化学方式:异硫***酸胍法碱裂解法 3 生物方式: 酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有: 硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤: 1 、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。 2 、细胞重悬于冰冷的 PBS 漂洗一次,离心收集。试验步骤 2 再重新作一边。 3 、加入 5mlDNA 提取缓冲液, (10mmol/LTris-%SDS) 混匀。 4 、加入 25ul 蛋白酶 K 使终浓度达到 100ug/ml 混匀, 50℃水浴 3h5 、用等体积的酚抽提一次, 2500rpm 离心收集水相,用等体积的(酚, ***仿, 异戊醇) 混合物抽提一次, 2500r/min 离心收集水相 6、用等体积的***仿, 异戊醇抽提一次。加入等体积的 5mol/L 的 LiCL 混匀, 冰浴, 10min. 。7、 2500rpm 离心 10min. 转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温 10min 。 2500rpm 离心 10min 。弃上清。8、加入 倍体积 3mol/L 乙酸钠() 与2 倍体积-20 ℃预冷无水乙醇。-20 ℃ 20min 。9、 12000r/min 室温离心 5min 。弃上清。将 DNA 溶于适量 TE 中。二,外周血 DNA 提取技术分离外周血白细胞提取方法: 试验步骤:1、取人肘静脉血 5ml , EDTA 抗凝, 2500rp m 离心 10min 。2、小心吸取上层血浆, 分装到 3个 离心管中。3、在血细胞中加入 3 倍体积的溶血液, 摇匀, 冰浴 15min 。4、 2500rpm 离心 10min , 弃上清。5、加入 10ml 溶血液, 摇匀, 冰浴 15min 。6、 3000rpm 离心 10min , 弃上清。7、倒置离心管, 去掉残液。 8 、得白细胞,- 80℃冻存。试验要求: 血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过 2h,4℃放置不超过 5h ,以防白细胞自溶。三,***仿法抽提外周血白细胞基因组 DNA : 试验试剂: Ligsisbuffer : 133mM NH4Cl ; 最后加灭菌去离子水至 1000ml ,高压灭菌。 ACD 抗凝剂: __________ 柠檬酸 柠檬酸钠 . 页脚.. 糖 ;最后加灭菌去离子水至 350ml ,高压灭菌。提取缓冲液( Extractionbuffer ): 10mMTrisCl(PH=)(PH=)(PH=)(PH=)20ml0. 5%SDS10%