文档介绍：IgG抗体的提取及鉴定总结
人血清IgG的提取及鉴定
离子交换层析法提取人IgG
血清IgG鉴定
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人血清IgG的提取及鉴定
离子交换层析法提取人IgG流程：
DEAE-纤维素预处理、采集样品（血清）
装柱、平衡
上样和洗脱
DEAE-纤维素再生
人血清IgG鉴定 ：
洗脱液抗原性鉴定—琼脂双扩散
纯度鉴定—免疫电泳
回收率的测定—分光光度法
IgG回收量的测定-直接ELISA
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离子交换层析的基本原理
离子交换层析（Ion Exchange Chromatography, IEC）是以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式。
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离子交换层析的基本过程
带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来，带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来。
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离子交换剂
在惰性载体上引入带有电荷的活性基团即离子交换剂。
纤维素－O－CH2－COO-－Na＋
基质 电荷基团 反离子
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阴离子交换剂
二乙氨乙基纤维素，弱碱性
DEAE-纤维素（阴离子交换纤维素）在 。
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人IgG的主要理化性质及DEAE-纤维素提取原理
人IgG特性:
血清含量：- mg/ml ；血清中的IgG属于中性蛋白（pI:-），其余均属酸性蛋白（pI:4-5 ）。
DEAE-纤维素提取IgG原理：
～，酸性蛋白被DEAE-纤维素吸附， IgG不被吸附而最早从柱中流出，而得以纯化。
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实验步骤
1、DEAE-纤维素预处理： 强碱处理 NaOH 抽滤、洗涤、抽滤（） 强酸处理 HCl 抽滤、洗涤、抽滤（）
强碱处理 NaOH 抽滤、洗涤、抽滤（）
PB液浸泡抽滤、浸泡
2、装柱、平衡固定层析柱 装 柱：柱高度、无分层、无气泡
3、样本（人血清）准备
抽静脉血分离血清透析（ PB液 4度过夜）
4、研磨蔗糖备用（纯化IgG浓缩用）
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实验步骤
5、上样、洗脱、收集洗脱液 上样 流速3ml/10min（记录上样总体积，保留部分血清）
洗脱 流速30-40ml/cm2/h
收集 5ml/管 （20%三***醋酸滴定、分光光度法检测） 6、DEAE-纤维素再生 2M NaCl 洗脱其他血清蛋白 拆柱、 浸泡 PB液
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