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合成过程的限速酶一紫杉二烯合成酶的Ce4+p-ERK1ike中学哪葛志强。，王材料与方法国稀土报莹ㄑ读O等猰篻瑁甤有一定的作用，并可有效地改变植物次生代谢的JunJNK(nrProTyr)p38旖虼笱Щぱг褐埔┕こ滔迪低成锕こ探逃恐氐闶笛槭遥旖越来越多的研究表明稀土可有效地影响动物、植物以及微生物体系的生长与代谢过程。在有关稀土对植物代谢的研究中，发现稀土不仅对植物生长、元素吸收、叶绿素形成、增加作物产量、改善品质有一定促进作用⋯，而且对不定根生成、细胞分裂、生长发育、愈伤组织产生以及离子吸收均强度’。虽然稀土对植物细胞作用的研究已有大量报道，但遗憾的是来自于大田实验、盆栽实验以4()561Ce4+可有效地促进悬浮培养的红豆杉细胞紫杉醇的合成与释放，该作用的发生可能与促进紫杉醇生物表达有关】。因此，将作为诱导子应用于悬浮培养的红豆杉细胞以促进紫杉醇的合成，但应用()Ce4+著不同。这种现象发生的原因或机制目前还不清楚，但可以设想这种现象的发生与生长不同时期的细胞对外界刺激的应答能力有关。细胞对外界刺激的应答能力与细胞对刺激的感知以及信号的[8]胞中的家族像动物细胞中的一样是各种外[91是一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶痶—超级家族，根据丝氨酸和苏氨酸之间MAPK3细胞外信号调节蛋白激酶狦琧．狦—⋯８菀阎5闹参颩的基因序列分析和同源性比较，已报道的植物都ERKMAPK[9]ERKERKlikeCe4+ERK1ike细胞早期应答过程中的一个重要事件。因此，对悬浮培养不同时期的红豆杉细胞的基础磷酸化猯—水平以及“作用后瓻．的表达变化进行了研究，取得的结果为进一步认识不同培养时期的细胞对响应差异的机制具有一定的意义。ERK1ike中图分类号：A文章编号：——一2666年月Ce4+WestBlot1对培养不同时期(pERK1ike)p-ERK1ikeM77ce4+p-ERK1ikece4+泶锼俾蚀锔叻濉＝峁砻鳌４τ诓煌嘌逼诘暮於股枷赴鋚．表达存在显著差异，这可能是导致不同培养时期细胞对产生不同应答效应的一个因素。收稿日期：——；修订日期：——作者简介：葛志强，男．天津人，博士，副教授；研究方向：细胞培养工程·V0126Dee2008
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2再设立ê蚇亩哉昭芯俊３迫．123PERK1ike试验数据应用统计学软件进行统计921材料111p(PMSF)Sigma嗫寺】固antiERKl(sc94)andantiERK2(so153)antibodiesantiERKI2)ECLSanta，***纤维素膜购自，其他试剂为市售分析纯。112采用的细胞株系是从东北红豆杉幼茎诱导来的东北红豆杉细胞cuspidata)B5(20gL1gL(NAA)mgL6(6BA)05·上继代培养，每三十天继代一次，然后转入改良的液体25110rmin1250三角瓶，内含有新鲜培养基，细胞接种量约为g()天继代一次，取第五代的细胞进行诱导实验。方法瓻．表达量的测定参照本课题l2|(1)样品制备：细胞悬液用·狿72)02g鞍琢呀庖海℃裂解“离心min(Bradford)(2)PERK1ike30g120SDS泳分离后，电转移到***纤维素膜上。用单克隆的ERK(antiPERKl2)磷酸化水平，二抗标记有辣根过氧化物ECL置于甀蚗射线暗盒中进行放射自显影。用软件对胶片上的带