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文档介绍：实验四 PCR扩增目的基因
【PCR 原理】
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类似于DNA的天然复制过程。
反应包括: 变性(Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基本步骤。
这三个基本步骤组成一轮循环，理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍，这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板，所以经25～35轮循环就可使DNA扩增达106 倍。
DNA的变性和复性
加热或强酸、碱性作用可以使 DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA,这称为 DNA的变性。
解除变性的条件后, 变性的单链可以重新结合起来,形成双链,其原有的特性和活性可以恢复,这称DNA复性, 也叫退火。
PCR扩增原理
延伸
变性、退火
变性
退火
延伸
变性：加热，使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链，即变性阶段。
退火：溶液温度降至45～65℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合，即退火阶段。
延伸：溶液反应温度升至72℃，耐热DNA聚合酶以单链为模板，利用引物的3’-OH，以反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）为底物，按5’－3’方向复制出互补DNA，即引物的延伸阶段。
PCR的三个热反应过程
PCR的产量
每一次循环后模板比前一次循环增加一倍。
DNA产量以指数上升，n个循环后，达到2n拷贝。
【仪器耗材与试剂】
（一）仪器与耗材
1. PCR热循环仪
2. 20μL、 200μL 吸头，200μL、500μL EP管，10μL、 50μL、200μL移液器
3. PCR 电泳仪和电泳槽
（二）试剂
10×PCR Buffer；
MgCl2, 25 mmol/L；
dNTP（ 其中包括dATP、dCTP、dGTP与dTTP；每种浓度均为10 mmol/L ）；
正向引物与反向引物（10 μM/L）；
Taq DNA聚合酶（1U/μL）；

DNA模板 （小鼠基因组DNA，100ng/μL ， 反转录cDNA）；
ddH2O
【实验步骤】
1. mL Eppendorff 管内配置20 μL反应体系：