文档介绍：中山大学
硕士学位论文
BMP/Smads信号通路调控人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的实验研究
姓名:杨柳青
申请学位级别:硕士
专业:口腔临床医学
指导教师:林正梅
20070531
疭信号通路调控人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的实验研究摘要节型鞍椎谋泶锉浠魇萍跋赴诙ㄎ唬教志銼信号通路在专业:口腔临床医学硕士研究牛:杨柳青导师:林正梅副教授在牙髓牛物学领域,骨形成蛋白,俳牙本质细胞分化和第三期牙本质的形成,在牙体牙髓的损伤修复中发挥重要调控作用,在保髓治疗中前景远大。本课题组前期研究证实,腺病毒介导的基因转染人牙髓细胞琱捎盏佳浪柘赴钚粤姿崦活性的增强,并提示其诱导成牙本质细胞分化。骨形成蛋白生物学效应的分子机制涉及两条重要的信号通路:鞍滓览敌院蚐蛋白非依赖性信号转导途径。˙藕抛5嫉木渫罚近年来研究的热点。本实验拟检测ど螧受体的表达,同时观察重组人瑀一对牙髓细胞碱性磷酸酶活性的调控作用,研究信号作用下废喙厥芴宓调控人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的作用,以了解生长因子的信号调控机制。目的:本研究采用体外分离培养的人牙髓细胞作为实验模型,检测牙髓细胞膜上芴宓谋泶铮胷一虰信号抑制剂研究藕哦匝髓细胞钚缘挠跋欤⒐鄄煸贐一癗饔孟耂信号蛋白的大学硕学位沦文疭信号通;髹跖∪算荩核鑬钼缌姿杳傅难缙镅芯一
表达变化趋势及胞内定位,探讨疭信号转导通路在调控人牙髓细胞内碱材料和方法:①收集因正畸治疗需要拔出的年轻健康完整恒牙,徒涸赶橹榉ㄔ代培养〉代捎肕比色法测定细胞生长曲线;免疫组织染色检测传代后人牙髓细胞的矿化分化特性。②取第鷋,以痬并以等剂量的藕乓种萍罭蠦信号阻断,同时检测牙髓细胞内钚浴"廴〉代捎肧ḿ觳鈎膜上叫褪芴—、—和谋泶铩"苋〉代捎妹庖哂ü饧蛋白的核转位情况。⑤取第鷋,实验组在痬①本研究采用徒涸赶橹榉ㄌ逋馀嘌搜浪柘赴晒ε嘌浪枳橹榫蠼又衷~欤杉赴幼橹橹芪С史渥磁细胞数量持续升高,第煲院笊は喽曰郝赴そ肫教ㄆ凇O赴丛鉴定结果显示,体外培养的牙髓细胞均为抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,提示细胞来源于间叶组织,无上皮成分混杂,符合牙髓组织学特征。经连髓细胞具有一定矿化分化潜能。②连续培养天,牙髓细胞内活性增强,而预先阻断藕磐房沙鱿諥活性被抑制的效应。③免疫组性磷酸酶活性中的作用。化学方法进行波形丝蛋白和角蛋白的免疫染色,鉴定细胞组织学来源:连续培养天,觳馐约梁屑觳馄涠匝浪柘赴鸄活性的影响,术检测刺激前后信号蛋白的细胞内定位,荧光显微镜下观察分别刺激、采用免疫印记法检测磷酸化./牡鞍妆泶锼郊氨浠魇啤R种萍磷橛玫燃亮康预处理后加入,继续孵育琖检测甋/蚐/鞍椎谋泶铩结果:出,一般茏笥页鱿只愫希山写ù籑结果显示细胞具有较强的增殖活性,细胞は喽曰郝τ诨郝3て冢~旖攵允て冢续培养芎螅浪柘赴纬煽蠡峤冢琕旧粜裕崾敬ù蟮难巾笱秄:卞位论文疭信号通路明托人爿:髓细胞喊性嶙眩酶的实『验研究
一呈阳性表达。④未受到刺激时,绿色荧光丰要分布在⑤在牙髓细胞内的信号转导,对牙髓细胞的分化指标碱性磷酸酶活性具有调控作用。本实验为进一步研究诱导牙髓细胞向成牙本质细胞分化的分子机制提供了实验依据;同时,利用对特异性信号通路进行调控以诱导牙髓牙本质复关键词:,赴ず拖赴蔅受体狪在细胞质,胞核内几乎无荧光可见。刺激后,绿色荧光丰要出现在细胞核内,细胞质内蛋白星弱阳性表达,蛋白呈现由胞质到胞核转位的趋势。免疫印记结果显示,在所观察的时间点,磷酸化—。阻断藕磐泛螅姿峄疭/谋泶锸艿揭种疲琒/的表达变化未见明显差异。结论::商岣哐浪柘赴诩钚粤姿崦副泶锘钚裕藕欧肿覵/斡肓合体损伤后修复,为进行临床保髓治疗策略提出新的思路。吆磐吩ㄍ腥搜浪鑖赜蛑窳捉廾傅恼善镅芯大学硕宦畚疭
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刖舌自我更新和分化潜力的间充质细胞,这些细胞具有向成牙本质分化的特性从而实化怼F渲校珺谂咛シ⒂⒏鎏逍纬伞⒐呛腿砉堑男纬杉靶薷垂讨蟹⒒病毒介导的基因转染人牙髓细胞可促使细胞内碱性磷酸酶钚成牙本质细胞分化【化调控机制的必由之路,也使我们有效地诱导牙髓细胞分化同时对分化过程进行目前研究认为,骨形成蛋白生物学效应的分子机制涉及两条重要的信号通成,是易灏˙藕抛5嫉木渫罚墙昀囱芯康娜鹊恪该信号通路为我们研究诱导成牙本质细胞分化的分子机制提供了契入点牙髓组织来源于外胚