文档介绍：弓形虫单克隆抗体的制备及生物学活性的初步鉴定摘要刚地弓形虫(ZgD胛访力是一种全球性的人畜共患寄生虫,该种寄生虫病的流行与传播不仅严重地影响着畜牧业的可持续发展,同时也对人类的生命与健康造成严重的威胁及危害。本实验目的在于利用分子生物学中的蛋白表达技术及单克隆抗体的制备等分子及免疫学相关技术,选用弓形虫速殖子抗原及膜表面主要致病性抗原P30作为免疫原,制备出弓形虫单克隆抗体为接下来建立弓形虫病快速、简便诊断方法和进一步的研究打下基础。通过对弓形虫P30基因的PCR扩增、克隆、测序,成功的构建了原核表达重组质粒pET32a-P30,并成功的诱导表达了弓形虫P30重组蛋白抗原,经纯化制备出了可溶性弓形虫P30重组蛋白抗原。同时采用小鼠腹腔收集弓形虫速殖子方法,用胰蛋白酶法纯化制备了弓形虫速殖子抗原,为后续试验提供了免疫抗原。用弓形虫P30重组蛋白抗原和弓形虫速殖子抗原分别免疫小鼠、经细胞融合,利用建立的间接ELISA方法对融合胞融克隆进行检测筛选,成功的用表达的P30蛋白制各了2株单克隆抗体杂交瘤细胞分别命名为5D5、 2A1;用速殖子抗原制备了2株单克隆抗体杂交瘤细胞,分别命名为586、 2D2。对这4株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的生物学特性进行了鉴定:经间接ELISA测定586、2D2、5D5、2A1四株杂交瘤细胞单克隆抗体上清的效价分别为:1:800、1:1 600、1:3 200、1:6400;腹水效价分别为:1:104、 1:104、1:105、1:105;经单克隆抗体亚型鉴定,4株单克隆抗体586、2D2、 5D5、2Al亚型分别为:Ig Gl,Ig M,IgG1和Ig M;染色体计数结果显示:4株杂交瘤细胞染色体计数为90"--'110条,均大于亲本细胞;经间接ELISA 检测和SPSS统计软件进行方差分析,四株杂交瘤细胞第一代、第十代细胞培养上清OD450值差异不显著,均能稳定分泌单克隆抗体。广西地区是人畜弓形虫病流行的地区,本实验成功的制备了抗弓形虫速殖子抗原和弓形虫P30重组蛋白抗原的单克隆抗体,并对其生物学特性进行了鉴定,为进一步研究弓形虫病的快速灵敏的诊断检测方法以及弓形虫病的免疫防治奠定了基础。关键词:弓形虫P30克隆表达单克隆抗体杂交瘤细胞 PREPARATION AND BIOLOGICAL CHARACTERISTICS IDENTIFICATl0N 0FZ移。X移尸!乙4删GDⅣD口MONOCLONAL ANTIBODIES ABSTRACT Toxoplasma gondii is aglobal zoonotic parasitic prevalence andcirculation ofthisparasitic disease not only influencethedevelopment of stockraisingseverely,but also menace thehealthofhuman purpose ofthisexperiment is to prepare monoclonal antibodies against Toxoplasma gondii by mainly using theprotein expression and hybridoma technique in immunology andmolecular work would setup thefoundation for further study on establishing diagnosis and prevention and cure of Toxoplasmosis. binant plasmid pET32a—P30 was Constructed by PCR,cloning, sequencing ofthe theprokaryotic expression binant plasmid pET32a—P30 was essful induced and Toxoplasma gondii P30 binant protein antigen was Toxoplasma gondii tachyzoite antigen wasmade bytrypsin method. Albino ratswere immuned by using binant protein antigen and tachyrzoite antigen ofToxoplasma hybridoma celllines,named as 586,