文档介绍：高三生物选修 3 易考知识点背诵本文由罗诗笔贡献 doc 文档可能在 WAP 端浏览体验不佳。建议您优先选择 TXT ,或下载源文件到本机查看。基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望, 进行严格的设计, 通过体外 DNA 重组和转基因技术, 赋予体外重组和转基因技术, 生物以新的遗传特性新的遗传特性, 创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品更符合人们需要的新的生物类型和生物产品. 基因工程是在 DNA 新的遗传特性更符合人们需要的新的生物类型和生物产品分子水平上进行设计和施工的, 又叫做 DNA 重组技术重组技术. 分子水平(一) 基因工程的基本工具 1." 分子手术刀" ——限制性核酸内切酶( 限制酶) 限制性核酸内切酶( 限制酶) 限制性核酸内切酶(1) 来源: 主要是从原核生物原核生物中分离纯化出来的. 原核生物(2) 功能: 能够识别双链 DNA 分子的某种特定特定的核苷酸序列, 并且使每一条链中特定特定部位的两特定特定个核苷酸之间的磷酸二酯键磷酸二酯键断开, 因此具有专一专一性. 磷酸二酯键专一(3) 结果: 经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式: 黏性末端平末端黏性末端和平末端黏性末端平末端. 2." 分子缝合针" —— DNA 连接酶 DNA (1) 两种 DNA 连接酶(EcoliDNA 连接酶和 T4-DNA 连接酶) 的比较:①相同点: 都缝合磷酸二酯磷酸二酯键. 磷酸二酯②区别:EcoliDNA 连接酶来源于 T4 噬菌体噬菌体, 只能将双链 DNA 片段互补的黏性末端黏性末端之间的磷酸黏性末端二酯键连接起来;而 T4DNA 连接酶能缝合两种末端两种末端, 但连接平末端的之间的效率较低. 两种末端低(2) 与 DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷酸单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端, 连接酶是连接两个 DNA 片段片段的末端, 形成磷酸二酯键. 两个 3." 分子运输车" ——载体载体(1) 载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存能在受体细胞中复制并稳定保存. 能在受体细胞中复制并稳定保存②具有一至多个限制酶切点, 供外源 DNA 片段插入具有一至多个限制酶切点, 片段插入. 具有一至多个限制酶切点③具有标记基因, 供重组 DNA 的鉴定和选择具有标记基因, 的鉴定和选择. 具有标记基因(2) 最常用的载体是质粒质粒, 它是一种裸露的, 结构简单的, 独立于细菌染色体之外,并具有自裸露的, 细菌染色体之外, 质粒裸露的结构简单的, 独立于细菌染色体之外并具有自我复制能力的双链环状分子. 我复制能力的双链环状 DNA 分子的双链(3) 其它载体: 噬菌体的衍生物, 动植物病毒噬菌体的衍生物, (二) 基因工程的基本操作程序第一步: 目的基因的获取目的基因的获取 1. 目的基因是指:编码蛋白质的结构基因. 2. 原核基因采取直接分离直接分离获得,真核基因是人工合***工合成. 和化学合成法化学合成法 技术扩增目的基因(1) 原理:DNA 双链复制 DNA (2) 过程: 第一步: 加热至 90~ 95℃ DNA 解链 DNA 解链; 第二步: 冷却到 55~ 60℃, 引物结合到互补引物结合到互补聚合酶从引物起始互补链的合成. DNA 链; 第三步: 加热至 70~ 75℃, 热稳定 DNA 聚合酶从引物起始互补链的合成热稳定第二步: 基因表达载体的构建基因表达载体的构建 1 1. 目的: 使目的基因在受体细胞中稳定存在稳定存在, 并且可以遗传至下一代遗传至下一代, 使目的基因能够表达和稳定存在遗传至下一代表达和发挥作用. 发挥作用 2. 组成: 目的基因启动子终止子标记基因目的基因+ 启动子终止子+ 标记基因目的基因启动子+ 终止子(1) 启动子: 是一段有特殊结构的 DNA 片段片段, 位于基因的首端首端,是 RNA 聚合酶聚合酶识别和结合的首端蛋白质. 部位, 能驱动基因转录出 mRNA 转录出 mRNA, 最终获得所需的蛋白质蛋白质(2) 终止子: 也是一段有特殊结构的 DNA 片段, 位于基因的尾端尾端. 尾端(3) 标记基因的作用: 是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因是否含有目的基因, 从而将含有目的基因的细含有目的基因的细是否含有目的基因抗生素基因. 胞筛选出来. 常用的标记基因是抗生素基因抗生素基因第三步: 将目的基因导入受体细胞_ 将目的基因导入受体细胞_ 将目的基因导入受体细胞 1. 转化的概念: 是目的基因进入受体细胞内, 并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程. 是目的基因进入受体细胞内, 并且在受体细胞内维持稳定和表达