文档介绍：各种DNA提取方法
一，基因组DNA提取方法
制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的 片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使 DNA断裂和 降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB 方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2化学方 式：异硫***酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有: 硅质材料、阴离子交换树脂等
试验步骤：
1、 贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、 细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一 边。
3、 加入 5mlDNA 提取缓冲液，(10mmol/LTris-%SDS) 混匀。
4、 加入25ul蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml混匀，50 C水浴3h
5、 用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的(酚，*** 仿，异戊醇)混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相
6、 用等体积的***仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL混匀， 冰浴，10min.。
7、 。加入等体积的异丙醇。室温 10min。
2500rpm 离心10min。弃上清。
8、 ()与2倍体积-20 C预冷无水乙醇。 -20 C 20min。
9、 12000r/min室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。
二,外周血DNA提取技术
分离外周血白细胞 提取方法：
试验步骤：
1、 取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm 离心10min。
2、 小心吸取上层血浆，。
3、 在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、 2500rpm 离心 10min，弃上清。
5、 加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、 3000rpm 离心 10min，弃上清。
7、 倒置离心管，去掉残液。
8、 得白细胞，—80C冻存。
试验要求：
血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4C放置不超过5h， 以防白细胞自溶。
三，***仿法抽提外周血白细胞基因组DNA :
试验试剂：
Ligsisbuffer :
;最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。
ACD抗凝剂： ;最后加灭菌去 离子水至350ml，高压灭菌。
提取缓冲液(Extractionbuffer ): 10mMTrisCI(PH=)(PH=)(PH=)
EDTA(PH=)%SDS10% ;最后加灭菌去离子水至 100ml，
咼压火菌
试验步骤：
1、 在500山抗凝血中加入ligsisbuffer1000 d，充分颠混至清亮。以4000rpm， 离心5min。弃上清液。
2、 沉淀中加入ligsisbuffer1500 d，充分匀浆。以6000rpm，离心5min。
3、 彻底弃去上清，加入extractionbuffer500 d (裂解细胞)，混匀置于37 C，水溶1h。
4、 加入8 d的蛋白酶K，颠混，37 C过夜(或55 C, 3h，但是37 C效果 要好些)。
5、 每管加入450 d饱和酚(取溶液下层)缓慢摇晃10min，以5500rpm， 离心15min。
6、 取上清，每管加入250 d饱和酚和250 d***仿—异戊醇，摇匀10min， 以 5500rpm，离心 15min。
7、 取上清，每管加入500 d***仿—异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离 心 15min。
8、 取上清，每管加50 d的3M的NaAC +，适量无水乙醇(预冷)至满， 摇匀放入-20C保存2h以上。
9、 以 12000rpm ,离心 20min。去上清，加入 70 % 乙醇 500 d，以 12000rpm , 离心5min ,去上清，50 — 60 C干燥。
10、 加入50 d灭菌去离子水，转弹，混匀。
四，Nal提取法提取外周血白细胞 基因组：
实验步骤：
1、 取外周抗凝血（全血）100ul于eppendof管中，12000rpm 离心12min。
2、 弃上清，加双蒸水200ul溶解，摇匀20s。