孔雀石绿的分析PPT课件.pptx

文档介绍：无色孔雀石绿(LMG)的结构式:
孔雀石绿(MG)的结构式：
第1页/共10页
孔雀石绿的检测方法
目前孔雀石绿的检测以理化检测法和免疫学检测法为主。
一、理化检测法
薄层层析法
分光光度法
气相色谱法( GC)
高效液相色谱法( HPLC)
液相色谱质谱串联检测法( LC-MS)
气相色谱质谱联用法( GC-MS)
二、免疫学检测主要用酶联免疫检测法。
第2页/共10页
国内孔雀石绿检测标准
第3页/共10页
理化检测方法适用于专业检测和实验室使用，,但难以满足现场快速检测和基层样品初筛的要求。近年来发展迅速的免疫分析法(IA)集免疫反应、有机合成、酶催化等先进技术于一身,具备快速准确,成本低廉等特点,可以满足现场初筛,快速判定的要求。
酶联免疫检测法
建立小分子免疫分析技术,关键点有3个:
人工抗原合成和抗体制备。
酶和抗体标记物的备。
检测技术方法学的建立。
LMG是小分子质,在免疫学上称半抗原,必须要同大分子载体偶联后才能免疫动物制备抗体。
第4页/共10页
无色孔雀石绿的修饰
无色孔雀石绿的衍生化反应途径
第5页/共10页
一、免疫原及包被抗原的制备
利用重氮化法将无色孔雀石绿修饰物与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)交联,制成免疫原及包被抗原
二、多克隆抗体的制备
将免疫原(LMG-BSA)与福氏完全佐剂以1∶1混溶,对两只新西兰大白兔进行多次免疫(第一次动物免疫将免疫原与福氏完全佐剂混溶,之后的动物免疫将免疫原与福氏不完全佐剂混溶),经5次免疫后,制得多克隆抗体。
第6页/共10页
三、间接酶联免疫吸附分析法步骤
用包被抗原(LMG-OVA)包被酶标板,200μL/孔， 4℃过夜。
用PBST缓冲液洗板3次, 300μL/孔，加入1%Casein进行封阻，室温放置1h,洗板。
加入抗体,标液(或样品稀释液)各100μL/孔,室温孵育1h。包被在酶标板上的固定抗原(LMG-OVA)和添加的标液中的LMG游离抗原与竞争抗体的结合位点。PBS洗涤扣干3次，游离的抗原抗体复合物被洗涤去除