文档介绍：实验蛋白质的沉淀反响与颜色反响
一、实验目的
掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反响，进一步熟悉蛋白质的有关反响。
二、实验原理
蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全一样，颜色反响亦不完全一样。颜色反响不是蛋白质的专一反响，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反响，因此不能根据颜色反响的结果来决定被测物是否为蛋白质。另外，颜色反响也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器
1、吸管 2、滴管 3、试管 4、电炉 5、ph试纸 6、水浴锅7、移液管
四、实验试剂
1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、 %苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸〔水浴加温助溶〕溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。
4、尿素晶体
5、1%cuso：1g cuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 44
6、10%naoh：10g naoh溶于蒸馏水，稀释至100ml
7、浓硝酸
8、%茚三酮溶液：%的乙醇并稀释至100ml.
9、冰醋酸
10、浓硫酸
11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml
15、氯化钠晶体
16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml
17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。 18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤
蛋白质的颜色反响
〔一〕米伦〔millon’s〕反响
1、苯酚实验：%苯酚溶液1ml于试管中，加millon’，电炉小心加热观察颜色变化。
2、蛋白质实验：取2ml蛋白液，加millon’，出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，观察现象。
〔二〕双缩脲反响
1、取少量尿素晶体放在枯燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加10%naoh溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% cuso4溶液，混匀，观察现象。
2、取蛋白液1ml，加10%naoh溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% cuso4溶液，混匀，观察现象。
〔三〕黄色反响
取一支试管，参加1ml蛋白液与浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后再参加10%naoh溶液1ml，观察颜色有变化。
〔四〕茚三酮反响
取蛋白液1ml于试管中，加4-8滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。
蛋白质的沉淀
〔一〕蛋白质的盐析作用
1、试管中加蒸馏水3ml，加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml，再参加饱和硫酸铵溶液2ml，摇匀静置观察现象。
2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐参加少量固体硫酸铵，直至饱和为止，此时析出为清蛋白。再参加少量蒸馏水，观察沉淀是否溶