文档介绍：⑧硕士学位论文东南“大学一研究生:鏖墼霆..塑∑皴基手中和表位的虞犁肝炎病毒基因。!ⅲ海海骸!QШ牛篞§.免疫的研究论文提交日期呈咝生§旦垫旦导师:重缝鸿疬窦·验淘壁甃度:.!!论文答辩日期鲤耋曼垣匡堂亟±:.公五申请学位级别学位授予日期答辩委员会主席评阅人、年密级:,一一一.~.:』’
基于中和表位的戊型肝炎病毒基因免疫的研究研究生房雪峰导师孟继鸿淌窦骏淌东南大学微生物与免疫学系中文摘要戊型肝炎琀是由戊型肝炎病毒琀鸬募毙圆《拘愿窝祝具有发病急、症状重、死亡率高等特点有鲋饕5牟煌蛐虎粜,流行病学资料显示Ⅳ型且鹞夜⒎⑿晕煨透窝椎闹饕2《局俊D壳癏形抻行У目共《局瘟埔┪铮因此呙缭贖乐沃械淖饔檬艿饺嗣堑闹厥觩;蛞呙缡且恢直妒苋嗣枪刈⒌男滦艘呙纾具有制备简单、性质稳定,特别是具有可同时诱导特异性体液免疫和细胞免疫等优点,已用于疫苗的研究【。我们在以往的研究中发现泻涂乖砦晃挥谄浠蜃榈诙谅肟蚣琽编码蛋白的第位氨基酸之间琽谥泻涂乖砦辉谟盏急;ば悦疫应答中的重要作用,本研究在获得了来源于一株第Ⅳ基因型的局昵液泻捅砦坏目乖一、基因编码序列的基础上,构建了植煌恼婧酥刈楸泶镏柿#逋庾H菊婧讼赴⒕部注射小鼠肌肉组织,检测它们在体内、体外的抗原表达水平并探讨载体和目的基因的选择对抗原在真核细胞内表达的影响;将构建的重组质粒基因免疫小鼠,观察其免疫效果。方法:应用逆转录巢式狿ù右恢桓腥綡术的弥猴的粪便悬液中扩增获得《基因编码序列,进行序列测定后与幸阎5个主要基因型的碇相应基因序列进行序列比对,以确定该局甑幕蛐停簧杓铺匾煨砸铮住为模板,应用ɡ┰:、.和.,并进行双酶切鉴定和序列测定;应用脂质体介导法将己构建的种不同的真核表达质粒体外转染烁伟┫赴⒕植孔⑸湫∈蠹∪庾橹挥τ妹庖哂ü夥êḿ觳饽康目乖谔逋釮细胞中的表达水平;应用免疫组化法检测目的抗原在小鼠局部肌肉组织中的表达水平:将能够在体内和体外真核细胞中有效表达目的抗原的真核重组表达质粒—蛎庖咝∈螅ㄆ谘劭舨裳#掷胙G澹浣覧法检测血清中特异性抗体水平并观察其动态变化;∈蟮钠⑾赴琈法检测其在特异性抗原刺激下的增殖水平。结果:经序列测定和比对后确定该心蛄欣丛从诘蛐筒《局辏换竦昧撕和表位的和目的抗原的基因编码序列;成功构建了植煌恼婧酥刈楸泶镏柿
一一蚿一好庖哂ü,∈蠹∪庾橹斜泶锏哪康目乖憾τ猛姆椒挥屑觳獾狡渌种重组质粒在体外转染的细胞中和体内小鼠肌肉组织中表达的目的抗原:与质粒基因免疫后的小鼠相比,—刈橹柿;蛎庖咝∈蠛螅谛∈蟮难G蹇梢约觳獾娇梗瓾特异性固澹固逅平呈现一定的动态变化;ǹ梢约觳獾絧刈橹柿;蛎庖吆蟮男∈蟮钠⑾赴谔异性抗原刺激下的增殖反应,与质粒免疫组有明显的差异。结论:获得了来自于一株第Ⅳ基因型部分序列,并在此基础上获得了含中和表位的和抗原基因编码序列;通过检测不同真核重组表达质粒在真核细胞内目的抗原的表达,发现抗原编码基因和载体的选择对抗原在真核细胞内的表达有一定的影响,同时得到了能在真核细胞内有效表达泻捅砦坏闹刈檎婧吮泶镏柿;一刈檎婧吮泶镏柿基因免疫小鼠后能够激发小鼠产生一定的特异性免疫效应,为进一步基于中和表位的’蛞呙的研究奠定了基础。关键词:戊型肝炎病毒:基因免疫:中和表位;载体;目的基因东南大学硕士学位论文一
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研究生签名:庙雌日研究生签名:摩查扯导师签名:迫皇逊日期:耻叠旦毒期:旦塑型门东南大学学位论文独创性声明东南大学学位论文使用授权声明的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得东南大学或其它教育机构的。学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外,允许论文被查阅和借阅,可以公布ǹ论文的全部或部分内容。论文的公布括刊登谌ǘ洗笱а芯可喊炖怼本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得已在沦文中作了明确的说明并表示了谢意。
言前毒,直径为~,表面有突起俊K鑦基因组