文档介绍：一. 以疗效确定的单体化合物( 天然产物或现有药物) 为探针, 利用计算机模拟单体分子与相关蛋白质三维结构及其相互作用, 找到所有的能与其特定结合的蛋白质, 这些蛋白质可能与活性药物单体发挥作用的机制相关, 因而也是潜在的药物靶标分子。二. 以正常组织与病理组织基因表达差异发现靶标基因在不同组织和疾病发生发展的不同时空存在明显的基因表达差异, 表达明显发生变化的基因常与发病过程及药物作用途径密切相关, 这些表达异常的基因很有可能是药物作用的靶点,可作为潜在的筛选药物的靶标[4] 。基因芯片技术、 mRNA 差异显示技术、抑制性消减杂交技术(SSH) 和基因表达系列性分析技术(SAGE) 等在现代生命科学研究中使用日益广泛, 这些技术在新的药物靶标的发现中也扮演了重要的角色。 1. Heller[5] 等利用基因芯片技术分析了正常及诱发病变的巨噬细胞、软骨细胞系、原代软骨细胞和滑膜细胞的 mR-NA 。发现了数种变化明显的基因, 其中包括基质金属弹性蛋白酶基因, 为治疗类风湿关节炎提供了新的药物靶标。 [6] 等利用该技术分析了霍奇金病(HD) 细胞系中 950 个基因的表达情况,并与EB 病毒永生化的 B 淋巴细胞系 LCL-GK 的基因表达谱相比较, 发现白细胞介素-13 及其信号转导通路可能成为治疗 HD 新的药物靶标。基因芯片用于药物靶标筛选的优点在于可同时比较疾病细胞和正常细胞中成千上万个基因的表达差异, 具有微型化和自动化的特点。缺点在于该技术成本昂贵、标记方法繁琐、检测灵敏度较低等。 [7] 等将 mRN A 差异显示技术用于乳腺癌细胞与正常乳腺上皮细胞的对比研究, 发现周期蛋白D2 在癌细胞中表达下降, 并且进一步实验结果暗示了周期蛋白D2 基因可能是 5- 氮杂胞苷治疗乳腺癌的一个靶基因。 [8] 等用该技术比较药物敏感的结肠癌细胞系 HT-2 9 与其耐药的3 个子细胞系的基因表达,发现 RegI V 基因在耐药的肿瘤细胞系中高表达, 而在敏感细胞系中表达水平很低, 深入研究 Reg Ⅳ基因的功能有可能发现新的治疗结肠癌的方法。 mRNA 差异显示技术用于靶标发现的优点主要在于 RN A 用量少、试验周期短、操作简便、可同时比较两种以上不同来源的 mRN A 样品间基因表达的差异。不足之处主要是假阳率很高, 可达 70% 。 [9] 等通过 SSH 技术研究与老鼠胚胎成纤维细胞(MEFs) 衰老相关的基因, 检测到 TARSH 基因在正常肺中高表达, 而在一些肺癌细胞系中表达显著下降。由此推测 TARSH 基因可能能够抑制肿瘤发生。 5. 刘海燕[10] 等人通过 SSH 技术发现了许多与肿瘤血管生成相关的基因, 深入研究这些基因有可能为抗血管形成治疗肿瘤提供了有价值的靶标。 SSH 技术具有操作简单、灵敏度高、假阳性率低的特点。但是 SSH 技术需要较多的起始材料, 并且只能同时进行 2 个样本间的比较。 [11] 等通过 SAG E 技术分析 Hel a 细胞中基因的表达模式, 发现了许多高表达的基因, 同时也发现了许多新的肿瘤特异性基因, 这为肿瘤的治疗提供了新的靶标。 [12] 等利用该技术研究 HIV-1 病毒感染人 T 细胞株